毕赤酵母是常用的异源蛋白表达的真核表达系统，相比较原核表达系统有后修饰和分泌表达的优势。在酿酒酵母中，表达盒能够特异地整合到靶位点；但是在毕赤酵母中，表达盒是随机整合到基因组中。因此，在同一批转化子中，它们之间的差异非常大，所以需要筛选大量的转化子来获得表达量较高的转化子。但是是哪个因素影响的转化子之间表达量的差异呢？
近日，AEM上发表了一篇文献为我们比较了不同因素的影响力。该文献共挑取了超过700个转化子进行比较，并选出了27个转化子比较了基因组序列。首先研究者们设计了两个表达质粒，以比较不同的整合位点的影响（GUT和AOX位置）。如下图：
结果表明，这些转化子之间的差异并不大。通过比较拷贝数与表达量的关系发现：拷贝数与表达量正相关，如下图：
挑选出表达量相对较高的菌株进行了基因组序列比较，基因组的缺少、重排和SNPs并无规律可言。说明，挑选出来的高表达菌株是拷贝数、缺少、重排和SNPs共同影响的结果，所以，仍然需要挑取大量的转化子得到表达量最高的转化子。不过筛选高拷贝依然是最有效的筛选方法。
文章题目：Effectof plasmid design and type of integration event on recombinant proteinexpression in Pichia pastoris
文章网址：http://aem.asm.org/content/early/2018/01/08/AEM.02712-17.abstract
面筋见解：依然记得研究生期间筛选几千个转化子愉（tong）快（ku）的回忆。看到这篇文献，也终于找到理论依据了，像毕赤酵母这类非常规酵母，依然需要大量筛选来获得最优组合。这也难怪都说学生物要常去拜拜，让运气好一点。
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