RTS无细胞蛋白表达系统概述
1.Introduction of RTS
RTS无细胞蛋白表达系统源自德国，是一类在无细胞状态下、在试管中完成目的的基因转录和翻译的试剂盒。RTS无细胞蛋白表达系统包含来源于大肠杆菌、麦胚和昆虫系统的各类试剂盒，可高效表达真核蛋白、原核蛋白、二硫键蛋白、Fab抗体片段、膜蛋白等多种蛋白。
反应体系分为小中大三种规格，最高可实现24小时内10ml体系中50mg
蛋白的表达。体外无细胞蛋白表达系统示意图如图1所示。
Characteristics of RTS
转录和翻译偶联
大肠杆菌、麦胚及昆虫的RTS体外无细胞蛋白表达采用高效的T7RNA/聚合酶系统，以及转录和翻译偶联的方式（图2）进行蛋白在体外的高效表达。
高产（High Yield,HY）和连续交换系统（Continuous Exchange CellFree,CECF）相结合的高效体系，通过能量再生系统和缓冲液体系优化，获得大肠杆菌高产（HY）系统；利用10kD的半透明膜将反应体系分为反应室和供应室，反应底物和能量可以通过半透明膜从供应室源源不断向反供应室提供，而反应产生的副产废物通过半透明膜扩散到供应室，有效延长了反应时间。RTS使用的CECF系统已申请专利，反应时间可延长至24小时。其原理示意图
HY系统与CECF相结合的大肠杆菌无细胞蛋白合成系统产量可高达6mg/ml
RTS试剂盒中50ul、1ml、10ml反应体系对应的供给体系分别为1ml、10ml和100ml反应装置示意图如图5所示。
Templates in RTS
RTS系统中可以直接使用mRNA作为翻译的模板，也可以使用PCR产物作为模板。PRC产物需要通过两次PCR反应加入T7启动子，终止子，核糖体结合位点His标签等原件，或者连接入载体。PCR产物模板生成和载体都提供试剂盒供选择，
RTS kits overview
Advantages of RTS
可方便合成的毒蛋白
只合成目标蛋白，易于提纯
可实现高通蛋白合成和筛选
操作简便，在试管中进行反应，只需要恒温震荡装置即可。
产量高，大肠杆菌CECF500系统1ml反应体系蛋白产量高达6mg
省时，体外表达系统在2-6小时，（batch系统）或24小时CECF系统可完成蛋白系统结合反应
操作灵活，可根据目标蛋白性质在反应体系中加入分子伴侣、去污剂及一些辅助因子，提高蛋白的溶解性及活性
根据实验需要，方便参入标记（荧光，生物素、同位素）氨基酸和非天然氨基酸
How to choose the suitable RTS kit?
8.