实训项目 一

2023-05-10 14:56:27

实训项目一、核酸的提取纯化技术

实训目的:

    1.  了解核酸分离提取、纯化的流程及原理。

        2.      掌握微量样品操作的基本技术。

实训任务:

实训人员通过指导教师讲解结合课本知识,首先掌握核酸分离提取纯化的流程及原理。其次,实训人员以蔬菜为实验对象,进行核酸的提取分离和纯化。

实训步骤:

1.  学习微量移液器的使用方法;

2.  学习核酸分离提取纯化的大体流程及原理:

细胞破碎(研磨)——细胞膜裂解(去污剂)——蛋白变性(去除蛋白)——沉淀核酸(不溶或微溶有机溶剂)——粗提样品(离心)——纯化(酒精溶液洗涤)——再次沉淀——溶解

3.  具体操作步骤:

1).取 2g 清洗凉干的新鲜叶片于研钵中,加 1/3 药匙石英砂和 4mL 2 倍的 CTAB 提取液,迅速研磨。破细胞壁

2).将 1mL 研磨液转入 1.5mL 离心管中,置于65水浴中保温  20min,其间颠倒混匀23次。破碎细胞膜

3. 12000r/min 离心  5min,取上清液约700μL转到另一离心管中。加入等体积氯仿:异戊醇(24:1)混合液,充分颠倒混匀。12000r/min,离心 5min抽提去蛋白

4).将上清液移入新的1.5mL离心管内,加 600 µL异丙醇。颠倒混匀,可见 DNA 絮状沉淀。沉淀核酸

5).12000r/min,离心 1min,倒掉上清液。加入70%乙醇溶液进行,用移液器吹打5-6次。(注意:不得将固体DNA带出离心管)。

6).12000r/min,离心 1min,倒掉上清液,重复第(5)步1-2次。  (纯化,去除有机溶剂)

7).12000r/min,离心 1min,倒掉上清液,将离心管倒置干燥。干燥后将沉淀溶于20µL TE 缓冲液待测。

实训结果及分析:

      描述每一步的实验现象。

      分析每一步个人操作对结果的影响。

      本实训的注意事项应该有哪些?

实训总结:

     个人是否完成了实训任务,是否达到了实训目的。学习到了什么能力或知识。

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