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植物蛋白提取试剂(Plant protein extraction kit)

宝枫林 2019-05-14 13:19:28


货号    产品名称规格价格
P1258-50植物总蛋白提取试剂 50ml420元
P1258-100植物总蛋白提取试剂 100ml660元


描述:

植物组织成分复杂含有较多的酚类物质、多糖、色素、次生代谢产物, 这使得植物蛋白质的分离提取变得困难。本试剂适用于多种植物根、茎、叶及果实等的新鲜或冻存组织,能够快速有效地提取植物中的可溶性和疏水性蛋白成分,有效去除组织中所含的多糖、脂质、此生代谢产物等干扰蛋白研究的成分,同时能够使提取的蛋白质处于最佳的活性状态和检测状态,适用于酶学活性测定,单向、双向蛋白电泳、Western Blot和免疫共沉淀等实验。
 
适用范围:提取多种植物组织和细胞如苹果、花生、土豆、烟叶、菠菜、梅花等。
组成: 50mL或100mL无色透明试剂
储存:4ºC,密封避光1年
 
操作步骤;
1.组织匀浆,必须充分匀浆,这一步非常关键。


(1)冻存组织匀浆:预先将研钵至于-20ºC或-70ºC冰箱内预冷。取液氮冻存的植物组织,放入冰冻的研钵内研磨成粉末,注意使样本处于冰冻状态,如样本颜色加深或变黑通常表明已经融化。将研磨好的组织转移到新管,按每200mg植物组织加0.5mL比例加入提取试剂,混匀后冰上放置20分钟,期间可数次颠倒混匀,使蛋白溶解。


(2)新鲜组织匀浆:取新鲜组织放入研钵中,按每200mg植物组织加0.5mL比例加入提取试剂,充分研磨至匀浆液中看不到大的块状或者片状组织,保证样本完全研磨破碎。转移至离心管内,冰上放置20分钟。


2.离心:12000g离心15分钟,将上清液转移至新的离心管中,直接使用或-70 ºC储存。


3.后续处理:

(1)如果进行酶学测定,直接取蛋白上清液加入反应。

(2)沉淀蛋白;首先估计制备的蛋白上清液体积。

方法一:加1/3体积30%三氯醋酸水溶液;

方法二:加入6-10倍体积的1:1混合的丙酮/乙醇; -20 ºC沉淀1小时或过夜。4 ºC ,5000g离心10分钟,弃上清,空气略干沉淀,用适量的1*SDS上样缓冲液溶解沉淀,95 ºC变性5分钟,上样电泳。适于进行SDS-PAGE、Western Blot、双向电泳等。

(3)直接电泳:需加入4*SDS上样缓冲液。上清如有少量色素一般不会影响蛋白电泳。

(4)免疫共沉淀:用蒸馏水等比例稀释提取的蛋白上清,进行免疫共沉淀。

(5)蛋白定量:用BCA蛋白定量试剂盒进行定量(产品货号P1511).
 
常见问题集解决方法:
1.提取的蛋白量少:

1)组织蛋白含量较少 ,如水果等,可增加组织量;

2)组织匀浆不充分,如纤维较多的组织破碎较困难,应适当延长研磨时间;

3)组织过老或水分丢失致使其干燥,应尽量选用新鲜较嫩的组织;

4)甲醇或丙酮沉淀后蛋白溶解不充分,应延长溶解时间或使用较强的蛋白溶解剂。
蛋白质量不佳:

1)提取的蛋白有多酚或色素等杂质残留,可重复用丙酮或甲醇沉淀;

2)蛋白质降解,操作个步骤应迅速,在冰上进行,用户也可以自行选择加入蛋白酶抑制剂。





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