*凝胶过滤层析一般用在杂质较少,后续的精纯阶段。
*凝胶过滤层析用在体积较小样品的纯化。
*在组群分离时(如脱盐)也可用在粗纯阶段。
*凝胶过滤层析分离时只需一种缓冲液,缓冲液种类几乎不影响分离效果,缓冲液中添加150mM的氯化钠可以有效避免非特异性吸附。
汇研生物琼脂糖凝胶过滤介质有交联4%和6%琼脂糖两种类型,称为Focurose 4B 和Focurose 6B。在琼脂糖凝胶的基础上一步交联得到交联琼脂糖凝胶(CL),称为Focurose CL-4B和Focurose CL-6B交联琼脂糖凝胶有更好的物理及化学稳定性。在琼脂糖凝胶的基础上二步交联得到高流速琼脂糖凝胶(FF),称为Focurose 4FF和Focurose 6FF,FF系列琼脂糖凝胶有良好的物理及化学稳定性,可进行湿热灭菌,可耐受蛋白生产中的各种工作条件。
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*装填的柱子的径高比在 1:15 到 1:100,太高反压增大。
*层析过程中加样体积应小于柱床体积的 10%,尽量控制在5%以内
*层析的样品中应避免存在固态形物。
*尽量降低样品的粘度。
*待分离的物质分子尺寸相差2倍以上。
汇研交联葡聚糖是一种球状的凝胶,含有大量的羟基,很容易在水中和电解质溶液中溶胀。G 型的交联葡聚糖有各种不同的交联度,因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同。交联葡聚糖的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。凝胶型号 G 后面的数字粗略表示 10g 该类型凝胶的吸水值(ml)。
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*湿胶可以湿热灭菌(120℃,30min),干粉加热至 120℃以上将开始焦糖化。
*强酸中凝胶骨架的糖苷键被水解,避免接触强酸。
*避免接触强氧化剂,避免接触糖苷酶。
*使用时流动相的成分及 pH 值变化会引起葡聚糖凝胶柱床体积变化,属正常现象。
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