蛋白质分离纯化遵循的原则

2023-05-10 14:56:27

总体原则

1）纯化前对样品的来源，目的蛋白的理化性质及生物活性要做充分了解。

2）纯化前明确纯化所要达到的目的及目标。

3）根据所要达到的目的在回收率，纯度，成本等之间合理取舍次要指标，把主要指标放在第一位。如科学研究，鉴定蛋白结构，纯度就是第一指标，回收率等次之。

纯化过程

纯化每一步都充分利用目标蛋白和杂质成分理化性质差异。如大肠杆菌菌体蛋白大多是一些低分子量蛋白（<50000Da），且酸性蛋白较多。

纯化方法的选择

根据蛋白理化特性选择分离材料和纯化方法，避免利用相同技术进行多次纯化；对纯化方法，及各种方法的适用性，各种方法的差异性做充分的了解。如排阻层析不适合用于分子量相差不到10%的样品的分离。

不同阶段突出重点

1）纯化早期尽量减少样品处理体积，方便后续纯化；如目的蛋白在发酵液中，前期用盐析，膜过滤等方式去除大量的水分和小分子杂质。

2）纯化后期由于样品处理量和杂质量都已减少，可使用价格昂贵的高效分离材料进行精制，利于降低分离纯化成本，提高产品收率和纯度，实现工艺性价比最优化。

大家在看