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蛋白、抗体分离难?我猜你一定没看过这个!Waters 新型反相色谱柱BioResolve

北京慧德易 2020-05-21 15:38:53


蛋白、抗体分离好难呀!

来看看我们的方法吧!

ADC药物的质量控制标准中,最重要的就是建立载药量(DAR)的分析方法,以IdeS酶解片段为检测对象的方案,通过检测含药片段的相对比例DAR值进行确定。按照常规的实验经验,采用了C4进行了方法优化,并对市面上的不同品牌进行了对比,相对满意的结果如下所示:

这个方案中,大多数片段的分离结果还是比较满意的,但是LC(1)Fd’(1a)两个载药片段与相邻峰没有基线分离,而这会影响方法的稳定性(这很重要!),对于转到QC是很不利的。于是我们使用了BioResolve这款新型反相色谱柱,最终的色谱图变成了下面的风格:

从上图可以看到,经过研发人员的优化,所有关键峰都得到了基线分离。而且特别方便的是,(敲黑板!!!)这个方法里用的是常规的乙腈-水体系,而不是其他厂家推荐的IPA三元流动相,大大节省了平台方法开发需要的时间。

 

那么,究竟是什么柱子有这么神奇的分离效果呢?下面我们就来介绍一下。

BioResolveRP色谱柱的填料颗粒形态和键合方式经过专门设计,是为解决这些难题量身定制的,专为完整mAb及其亚基的LCLC-MS分析而设计。BioResolve RP色谱柱的表面多孔颗粒和大孔径(450 Å,压汞法测定)可改善其分离生物大分子(如mAb)的动力学特性和分离性能,而创新的多苯键合相则赋予该色谱柱有利分析的解吸行为和独特的选择性,同时使其保留性与传统RPLC色谱柱相当。此外,2.7μm硅基实心核颗粒产生的柱压较低,因此灵活性更强,在产品的整个生命周期内可用于各种LC平台,而不会对性能产生不良影响。

 

特 点


1.     填充有硅胶实心核颗粒,颗粒表面为孔径450 Å的涂层,在蛋白质分析中可实现无可比拟的分离度和优异的回收率,而且进样之间残留极低。

2.     采用创新的多苯键合相键合技术(正在申请专利),在LC (0.1% TFA)LC-MS0.02% TFA0.1% FA)应用中,对完整mAb及其亚基拥有卓越的分离性能。

3.     HPLCUHPLCUPLC仪器上的性能没有差别。

4.     使用mAb亚基标准品(即经过还原的IdeS酶解NIST mAb参比物质8671)进行了QC测试,可确保色谱柱之间的性能一致性。

下面来看看BioResolve RP色谱柱分离完整抗体的色谱图。



    使用BioResolve RP 色谱柱分离完整抗体。色谱图的局部放大图证明样品异质性实现了高分离度的分离。梯度:乙腈在10 min内从25%增加到45%(添加0.1% TFA)。流速:0.5 mL/min


那么,究竟是什么柱子有这么神奇的分离效果呢?我们再来介绍一下。


   三款色谱柱分离六种抗体所得的色谱图的叠加图。BioResolve RP 色谱柱分离六个样品的分离度都高于市场上业内领先的C4色谱柱和聚合物色谱柱。梯度:乙腈在10 min内从25%增加到45%(添加0.1% TFA)。流速:0.5 mL/min

您还在等什么?如果在蛋白和抗体的分离上存在困难,请咨询我们。慧德易一定给您满意的答案!


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