在蛋白质组学研究领域,基于液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)技术的发现蛋白质组学可在生物样本中检测和相对定量上千个蛋白,在过去十几二十年中已得到广泛的应用,并且发展出了标记定量(iTRAQ/TMT、SILAC)和非标记定量(label free)两种主流方法,这些方法都是基于数据依赖采集模式(data-dependentacquisition,DDA)来采集蛋白质谱数据的,该方法也称为“鸟枪法(shotgun)。
那下边,我们就来给大家介绍一下另一项十分受欢迎的技术吧~
数据非依赖性的扫描模式(data-independent acquisition,DIA),基于MRM/SRM/PRM的靶标蛋白质组学,可以为几十到上百个目标蛋白提供精确的绝对定量结果,并且重复性很高,是质谱绝对定量的金标准。但通量相对较低,无法开展高通量蛋白的精确定量。
该技术融合了传统蛋白质组shotgun的高通量和质谱绝对定量金标准MRM/PRM的定量精确的优点。近三年DIA的发表文章数目增长迅速,是目前蛋白质组学研究领域的香饽饽。
DIA技术更适合于大样本量、复杂体系的蛋白检测。
那下边我们来看看DIA技术的优缺点吧~
DIA
优势
1
重复性大幅度提升:相比于DDA模式,DIA缺失值更少,不会有共流出效应,数据利用度和重复性大大提高;
2
3
但是,DDA数据采集模式也有重复性差、定量不精准、数据缺失多、低丰度蛋白难以检测等固有缺点。
总结:
通过DIA和DDA的比较,我们知道,DIA在鉴定蛋白数目、重复性、定量准确性等方面都优于DDA,数据利用度大大提高,因此十分适用于生物标记物的筛选。
但鉴于DIA定量二级谱图的复杂性,需要先采用DDA方式构建一个谱图库。
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