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广东省实验动物监测所心血管模型组
正
所谓技多不压身，Western Blot作为一种常用的分子生物学实验方法，是很值得广大读者去了解的，下面我们一起来学习吧。
亲民的
Western Blot
又称为蛋白质印迹法
什么是蛋白免疫印迹
"蛋白免疫印迹（Western Blot）是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。"
——百度百科
western blot 到底是啥
其实说到底，Western Blot就是将组织与细胞中的总蛋白提取出来后，通过电泳将各种蛋白区分开，通过一系列操作后可以相对准确测量出各组目的蛋白含量变化的一项技术。
那western blot 原理是什么？
图片源自：生物无忧http://www.swwy.com/
Western Blot技术主要是通过凝胶电泳技术区分不同的蛋白质，并将所分离的蛋白质转移至固体支持体也就是上面所说的PVDF膜上，当PVDF膜上的蛋白质与第一抗体特性性结合后，第二抗体与第一抗体再次发生特异性结合，然后再用特殊的发光物质与第二抗体结合后，通过一定的操作手段对其发光强度进行检测，从而对靶蛋白分子含量进行检测的一种方法。
Western Blot基本操作流程
1.提取组织细胞中蛋白样品
2.对蛋白样品进行定量分析
3.对已确定含量的蛋白样品进行变性处理
4.通过凝胶电泳各种蛋白区分开
5.将凝胶上的蛋白转移到PVDF膜
6.对PVDF膜封闭
7.第一抗体/第二抗体孵育
8.将PVDF膜进行显影
9.去除一抗二抗（strip膜再生）
10.重新封闭、孵抗体来检测其他蛋白
WB小趣闻：提起Western blot，其实还有另外两种名字相似的技术，那就是Southernblot和Northern blot，它们其实比Western blot更早出现。1975年，Edwin Southern教授发明了DNA杂交检测技术，故将其命名为Southern blot。之后，James Alwine、David Kemp和George Stark三位教授发明了原理与Southern blot相似的RNA杂交检测技术，称为Northern blot。George Stark这位牛逼教授不久后又开发出原理类似的蛋白质检测方法，故将其命名为Western blot。
接下来几天小编将讲述Western Blot实验操作的具体方法，大家不要弃篇喔~
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