个试剂盒搞定外泌体研究:磁珠法纯化,流式分析

图1：外泌体形成和作用方式示意图。

外泌体纯化：难

调查发现，约有56%的实验室采用超速离心法分离外泌体，但该方法有其局限性：

• 耗时耗力：需8-30个小时

• 处理样本少：每次最多处理6个样品

• 需要大量的起始材料

• 产量不高

外泌体分析：难

由于外泌体体积小（直径30-100nm），流式检测也是一大难题。

图2：由于外泌体体积小，很难用流式检测到单个的外泌体。检测到的颗粒更像是外泌体群或聚集体。

基于美天旎的MACS技术，利用外泌体表面常见的四次跨膜蛋白CD9、CD63和CD81，分别研发了四款磁珠试剂盒，用于阳性分选外泌体，简单三步（磁珠孵育、磁场分离、洗脱，如图3），省时省力，无需进行超速离心，且样本体积最小可至0.5mL。

图3：利用美天旎Exosome isolation kit，简单三步（磁珠孵育、磁场分离、洗脱），1.5h内完成外泌体的纯化。

分析外泌体蛋白的传统方法有western blot、质谱分析、扫描电镜和流式分析。由于外泌体的直径太小（30-100nm），很难通过标准的流式检测方法对其进行分析。为此，美天旎研发了MACSPlex Exosome Kit, human（#130-108-813）试剂盒，用于简单、快速的分析外泌体表面37种潜在蛋白。

图4：MACSPlex Exosome Kit原理和步骤示意图。

MACSPlex Exosome Kit原理和步骤：

1. MACSPlex Exosome Kit含有耦联39种抗体的捕获微球，其中2种同型对照抗体，因此可以一次检测37种潜在的蛋白marker。【外泌体与捕获微球共孵育后，表达不同表面抗原的外泌体被含相应抗体的捕获微球识别并结合，进而形成捕获微球-外泌体复合物】。
   

2. MACSPlex Exosome Kit还包含荧光素标记的检测试剂，包括常见的三种外泌体marker，CD9、CD63、CD81。【根据表面抗原不同，检测试剂识别并结合到捕获微球-外泌体复合物上，形成带有荧光标记的捕获微球-外泌体-CD9/63/81检测试剂复合物，即可通过荧光强度进行流式检测】。

不同来源的外泌体表达的肿瘤抗原标记明显不同

利用MACSPlex Exosome Kit对黑色素瘤细胞和结肠癌细胞中的外泌体进行分析。黑色素瘤来源的外泌体都是MSCP+的，但却几乎不表达CD326。同时，流式分析可见，不同肿瘤来源的外泌体表达的抗原标记也是明显不同的。

图5：利用MACSPlex Exosome Kit对黑色素瘤细胞和结肠癌细胞中的外泌体进行分析。

结合美天旎MACSQuant流式细胞仪预设程序“MACSPlex_Exosome”，能够实现外泌体的全自动检测和分析。

图6：利用MACSPlex Exosome Kit分析表达不同表面Marker的外泌体分群情况。