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最新核酸纯化应用技术-革命性创新

南京艾夫特工业技术有限公司 2020-03-26 07:40:02

序言: 

样本制备是所有分子生物学实验的第一步和基础,如何获得高得率、高纯度的核酸产物就显得尤为重要。 

核酸纯化大致分为以下四个步骤: 

1、 裂解。将核酸释放出来 

2、 结合。核酸与硅胶膜/磁珠结合 

3、 洗涤。通过乙醇清洗将杂质洗掉 

4、 洗脱。核酸与硅胶膜/磁珠分离,洗脱至洗脱液中,得到纯化好的核酸 

 

本公司核酸纯化具有专利性的双缓冲液技术(Dual Chemistry Technology),采用独特的裂解缓 冲液和新型的结合缓冲液,无需使用高浓度离液盐结合,具有以下优势:

 1、 提供温和的反应条件和更为稳定的裂解环境,最大限度的提高裂解样品、降解蛋白质的效率,提高核酸提取得率 

2、 提供更加温和的化学环境,使得纯化的核酸遭受更少的化学剪切作用,从而提供更为完整的核酸片段 

3、 低盐浓度缓冲液可以有效减少后续的清洗步骤,节约时间 

4、 纯化产物中无盐离子,对下游实验无抑制作用,可以长久储存 

 

衡量核酸产物质量好坏的标准:

 1、 得率=浓度×洗脱体积 

注意:不能以浓度来判断,如核酸产物A的浓度100ng/ul,洗脱体积100ul;核酸产物B浓度200ng/ul, 洗脱 50ul。如果单以浓度来看是 B 结果好,但计算得率后发现 A 和 B 结果一样。这就要求各位在询问 客户对核酸产量的要求时不仅要问浓度还要问洗脱体积,计算出得率才能够客观的对核酸产量进行评 价。 


2、 纯度

 A260/280:DNA=1.8  >1.8,RNA 污染(RNase 处理);<1.8,蛋白、酚类等污染 RNA=2.0  >2.2,RNA 降解成单核苷酸;<1.8,蛋白、酚类等污染 A260/230:理论值 2.5,>2 结果可接受。<1.5,说明有糖类、盐类、有机溶剂、苯酚、异硫氰 酸胍(Trizol)等污染

A320/340:考察浊度,悬浮物。A320=0 

A230:碳水化合物、糖类、盐类、有机溶剂等小分子化合物最高吸收峰 A260:核酸最高吸收峰 A280:蛋白质、酚类等最高吸收峰 

 

如果核酸产物纯度不好对如下下游实验有影响: 

1盐残留,对 PCR 抑制

2. 酶切影响,影响酶活性,进而影响酶切效率(A260/230 比值低)

3. 影响反转录,进而影响 qPCR

4. 构建文库质量低,进而影响 NGS 

自动核酸纯化仪 InnuPure C16 是中小型核酸纯化仪中唯一采用转移液体的方式进行核酸纯化的仪器, 与传统转移磁珠/膜法的方式相比,具有以下优势: 


1、 产物无磁珠残留:通过内部底座上的磁力板将磁珠吸附在管底,上清液产物通过 tip 吸出到产物收集管 中,这样的分离方式可确保核酸产物中完全没有磁珠残留,非常洁净,无需离心即可直接应用与下游实 验。其他品牌采用转移磁珠的方式,磁珠回收率 95%左右,使用时间长了以后会发现收集管底部有黑 色磁珠大量残留,严重影响下游实验的应用。纯化过程中每次磁珠转移都会有损失,也就是说结合在磁 珠上的核酸会有损失,最终导致核酸得率下降。


 2、 无污染:整个纯化过程从里往外不走回头路,可有效防止样品间交叉污染。即用型试剂密封预装在试剂 条/板中,只有在使用时 tip 才会自动穿破封膜取样,能避免试剂因过早暴露而被污染。内置的紫外灯可 有效清洁仪器内部,确保整个环境的洁净。不锈钢样品盘可拿出仪器外进行消毒清洁,仪器前舱门可完 全打开,便于清洁舱内的各个角落。其他品牌有些试剂虽然也是预装密封的但放入仪器前需撕膜,试剂 过早暴露易交叉污染,撕膜时孔中的试剂有可能蹦出进入其他孔而发生交叉污染。还有的品牌采用开放 系统,试剂需人工分装,既浪费时间带入人为误差又引入了交叉污染的可能,只能说这是台半自动的仪 器违背了客户购买全自动核酸纯化的初衷。 


3、 产物质量高:底座的加热功能可促进样品的完全裂解,提高产物得率。可根据初始样品量的不同来调节 最终核酸产物的洗脱体积,使得最终获得的核酸样本浓度符合用户实际需求。C16 有 3 处加热,第一个 是裂解时加热提高裂解效率,第二个是洗涤完成后加热蒸干酒精提高纯度,第三个是洗脱时加热提高洗 脱效果。 


4、 标准化操作:只需使用预装好的试剂条/板,打开预编好的程序,一切均由仪器完成,人为操作降至最 低,最终获得的产物得率稳定,非常适合标准化的工作要求。其他品牌开放系统需根据第三方试剂自行 优化和编辑程序。 


5、 方便直观:不用加液,不用离心,只需将试剂耗材摆放在样品盘上,将样品盘轻推入内,选择相应的程 序运行,最终核酸产物直接存放在带盖的收集管中,无需再转移产物。不用操作电脑软件,不用编辑纯 化程序,整个纯化过程在仪器自带的触摸显示屏上实时显示。免费提供核酸纯化程序并终身免费升级, 无需购买程序卡 


6、 灵活高效:1-16 通道的处理量,最快 40min 可完成一批样品的核酸纯化工作 


7、 应用广泛:适用于多种样本类型,如血液、动物组织、植物组织、粪便、细胞培养物、小鼠尾巴、细菌、 病毒、擦拭样品、法医材料、食品等 DNA 或 RNA 的提取纯化,可处理 2ml 的全血样本 。


       德国耶拿新一代核酸提取技术Smart Extraction改变了核酸提取的方式。该技术无需酚/氯仿、无需离子交换、无需离心柱、无需硅胶膜、无需磁珠,将核酸结合于智能改性表面。整个提取过程无需离心、无需真空抽滤、无需收集磁珠,仅需tip上下吹打即可。提取得到核酸得率高、纯度好且完整性好。易于实现自动化,可应用于耶拿的所有自动化仪器上。