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蛋白鉴定 RNA pull down蛋白质谱(开学促销)

艾博思生物 2019-06-11 11:52:37

lncRNA研究方法:蛋白质谱鉴定(促销季)


导语

艾博思供高灵敏度、高可靠性的LC-ESI-MS/MS蛋白质分析鉴定技术。我们的服务质量满足您实验与文献发表要求!


为了满足广大客户不同的要求,根据蛋白质样品的性质我们提供了以下三种蛋白质的鉴定服务。


1.蛋白质凝胶样品鉴定 (Identification of Protein Gel band/spots)


我们公司接受各种类型染色的蛋白胶带或胶点(gel band or 2D gel spot) 样品,包括考马斯(coomassie blue)、coloidal 考马斯 (coloidal coomassie)、银染(silver staining)、荧光染料(fluorescent dye)、Zn/Cu2+等等。


2. 简单混合物鉴定 (Identification of simple protein mixture)


这项服务可用来鉴定200个蛋白质以内的蛋白混合物。


3. 蛋白质混合物的完全鉴定 (Complete profiling of complex protein mixture).

我们以优惠的价格提供完全鉴定复杂蛋白质混合物的服务,客户可以节省SDS-PAGE电泳,染色,以及切割蛋白凝胶条带所需的大量宝贵时间,而得到更好的结果。这项服务旨在帮客户得到完整的蛋白样品分析结果,特别是含量很低的重要蛋白。



1.蛋白质凝胶样品鉴定 (Identification of Protein Gel band/spots)



服务介绍


LC-MS/MS 是当前世界上鉴定凝胶(包括二维凝胶)分离的蛋白胶带最灵敏、最可靠的方法。与MALDI-TOF的蛋白质鉴定方法相比,LC-MC/MS具有更高的灵敏度和几乎100%的可靠性,而且具有MALDI-TOF不可比拟的从单一蛋白质胶带中准确鉴定出多个蛋白质组分的能力。


接受各种类型染色的蛋白胶带样品,包括考马斯、coloidal 考马斯、银染、荧光染料、Zn/Cu2+等等。我们对样品中蛋白质的含量没有最小限度的要求。除银染的蛋白质胶带样品之外,我们保证对每一个可见的蛋白质胶带的成功鉴定,没有成功的鉴定完全免费。


工艺流程



样品要求



1.为增加可检测的多肽数量,可以在跑胶前对样品进行Reduction/Alkylation处理。详细步骤请咨询技术支持。


2.每个胶带垂直高度应小于2.5毫米。 大于2.5毫米垂直高度的凝胶切片将被自动切割至2.5毫米。虽然我们会尽可能留下主要的蛋白质胶带,但不能保证蛋白带经过进一步切割后能留下您需要分析的部位。


3.每个一维胶带应该只包含一个可见的蛋白带。


4.对于含量特别低的样品,您可以向我们提供一个备份样本,在第一次结果不理想的情况下用于进一步的测试,这是没有任何额外费用的。


5.请给我们提供一张电泳图片,有助于我们更好的分析样品。


6.用银染法染色的样品,需使用一个与质谱兼容的银染试剂盒(如Invitrogen公司的SilverQuest)。


7.每个样品应无污染,避免蛋白质胶带与手直接接触,避免弄脏盛胶容器或看(X)片灯表面。在凝胶染色和脱色过程中,应使用新的或保证干净的容器,不要将凝胶直接放在光箱上切割蛋白质,应在光箱上放一块干净的透明的塑料薄膜,然后将凝胶放在膜上进行切割。


仪器


质量承诺


如果鉴定失败,凝胶(除银染样品外)样品的服务将免费,(这个承诺仅限可见的蛋白质胶带,且蛋白质序列存在于当前的 NR 数据库中)。



2. 简单混合物鉴定 (Identification of simple protein mixture)



方法


定性定量分析   Nano-LC-ESI-MS/MS;  Label-free  


服务介绍


这项服务可用来鉴定200个蛋白质以内的蛋白混合物。比如用免疫沉淀方法制备的蛋白质复合物(抗体应交连在固体载体上), 或用Pull-down方法制备的蛋白质复合物。与单个蛋白质胶带的鉴定相比,这种方法能用较低的费用鉴定出200种以内蛋白质。


工艺流程



样品要求


1:溶液样品中不应含有大量的抗体,大量浊染的蛋白或杂质蛋白质。这类蛋白质的存在会影响低浓度蛋白的鉴定。如果有大量的杂质的存在,跑胶后再进行质谱鉴定会得到更好的数据。


2:用大约10%的溶液样品跑的SDS-PAGE胶,并把照片与样品一起寄给我们。如果您不清楚一个样品是否可用于这种分析,可先把照片用Email发给我们。


3:所有的溶液样品的邮寄必须放在干冰(或Icepack)的容器中



3. 蛋白质混合物的完全鉴定

(Complete profiling of complex protein mixture)



方法


定性定量分析   LC-ESI-MS/MS;  Label-free  


服务介绍


以优惠的价格提供完全鉴定复杂蛋白质混合物的服务,客户可以节省了SDS-PAGE 电泳,染色,以及切割蛋白凝胶条带所需的大量宝贵时间,而得到更好的结果。这项服务旨在帮客户得到完整的蛋白样品分析结果, 而特别是那些浓度很低但非常重要的蛋白。


步骤:


样品要求:

不需要对样品进行浓缩

请避免角蛋白污染



优质的服务



1、周转时间: 整个样品分析时间为10个工作日。

2、品质保证: 对合格的样品我们保证给出一个成功地准确的鉴定。


可能会导致失败的原因:


a). 样品来自于一个未知蛋白质。因为LC-MS/MS蛋白鉴定技术要通过蛋白质序列数据库的检索, 所以缺少蛋白质的序列信息会引起鉴定精度下降甚至无法鉴定。在大多数时候下,我们仍可以从其他的已知序列的近缘物种中找到类似蛋白质。 这种物种交叉的鉴定方法在哺乳动物中比较有效,但对于其他一些物种,比如细菌、真菌、植物和昆虫,由于物种的多样性鉴定的准确度可能大大降低, 甚至不能得到成功的鉴定。


b). 银染的胶带。对于银染胶带的蛋白不能保证成功的鉴定,因为1)某些银染过程会导致蛋白与凝胶基质发生交联,从而无法将多肽从凝胶重提取出来。 2)银染样品中的蛋白含量可能低于蛋白鉴定所要求的最低量。例如,Invitrogen公司生产的一种可以与质谱分析相兼容的银染试剂(SilverQuest, LC6070) ,可以染色最小量为0.3ng或者3 feto gram。这个量低于质谱分析所需的最低量(大于1ng)。当然,实际上我们分析的大多数银染样品都得到成功。 我们在分析银染样本是成功率达到85%到90%。

 

3、客户服务: 鉴于蛋白质分析鉴定技术的复杂性,对于技术问题,希望客户用电子邮件的方式与我们联系, 我们的资深科学家将会在24小时内用Email给予答复,一般的非技术问题可以用电话或电传与我们联系。 我们递交给客户报告将包括我们分析过程和分析结果的详细资料,我们也可以以优惠的价格为客户提供用于在专业杂志上发表的图谱。



蛋白质鉴定服务的样品准备指南

(Instructions for using ProteinID service)



样品的准备


浓缩样品: 蛋白质样品可以用沉淀,膜分离,分离柱,冷冻干燥等各种方式进行浓缩, 用户应根据样品的特点选择合适的方法共列,用SDS样品液可以从色谱样上中洗脱蛋白,从而保持样本体积最小。


电泳凝胶: 对于SDS- PAGE,传统的Laemmli式,三甘氨酸凝胶及其各种改进型的凝胶,如二,三凝胶或三盐酸凝胶, 都可以兼容于蛋白质鉴定。各种凝胶浓度也没有限制。用户选择凝胶的类型和浓度液,应根据对对应是对样本的最佳分离效果而决定。 出于未知原因,三,黄酮凝胶似乎与蛋白质识别的相容性要差一些。


染色凝胶剂: 传统的考马斯(G250或R - 250)染色剂能够有效地对蛋白质的染色。胶状考马斯染色剂包有更低的检测范围 (~5 ng BSA)。其他的染色方法,如锌/铜染色,荧光染料染色,银染色法都是可以用于蛋白质鉴定。


切割蛋白带: 在切胶带之前拍一个凝胶的照片并附样品寄给我们。凝胶在切割过程中应避免与手,灯箱, 或任何其他可能的角蛋白污染源直接接触。在切割蛋白胶带适应尽量避免割下空白凝胶(它可能降低酶切的消化效率和多肽的回收率)。 将每个凝胶带置于干净的,1.5毫升的微型离心管并给每个样本小心地做上标签。


样品的邮寄


在线询问艾博思的技术服务人员,填写蛋白送样表格,将表格和样品一起邮寄。


所有样品都有以快递的方式邮寄,这样会减少使蛋白降解的可能性。凝胶样品最好可以用有干冰的或制造冰袋盒子来盛装, 但蛋白质较高的凝胶样品也可以在常温下用快递邮寄。请将每个凝胶样品分装在1.5ml的离心管中,盖好并置于一个干净的容器中(为纸盒式塑料盒) 以防在运送过程中破裂。另外请将报价表和样品的凝胶照片随样品一道寄出。所有液态的样品均需有干冰的盒子包装。


付款方式


为了尽可能地缩短客户的等待分析结果的时间,我们在收到样品后即开始分析测试。客户应在我们完成测试之前进行测试费转帐, 并将转帐底单电传至021-387708632。我们在接到转帐底单并核实后将测试报告送给用户。请将测试费转入以下账户:


账户名称:上海艾博思生物科技有限公司

开户行:中国工商银行上海市张江支行

账号:1001194909006845519


数据递交: 一般情况下,我们会在收到样品10个工作日内用Email方式或Fax给客户递交分析报告,如特殊需要,我们也可以用快递送交结果。


技术支持: 对于我们的服务的技术问题,您可以发送电子邮件至support@ibsbio.com。我们会在24小时内回复您的电子邮件。 您也可通过电话或传真联系我们。




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