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新医青年 2021-05-10 09:33:43

临近期末了

各种考试接踵而来

前两个星期

小编我考了免疫实验

这个星期小编我要考生化实验

(因为分单双周有的同学已经考过了

但是有的同学还没有考)

下面小编我要给你们推荐一下

生化实验知识点


1.比色法:利用比较溶液颜色的深浅来测知溶液中所含有色物质浓度的方法。

2.分光光度法

(1)可见光分光光度法:用可见光(400-760nm)测定有色物质含量的方法。

(2)紫外光分光光度法:用紫外光(200-400nm)测定无色物质含量的方法。

3.单色光:单波长的光

4.光的色散:混合光分解成单色光的现象。

5.互补色:两种适当颜色的光按一定强度比例混合可以形成白光,这两种光成为互补色光。

6.吸光度E:溶液对光线的吸收程度。

7.标准曲线法:标准样品配制成不同浓度的标准系列,在与待测组分相同的色谱条件下,等体积准确进样,测量各峰的峰面积或峰高,用峰面积或峰高对样品浓度绘制标准曲线

8.朗伯比尔定律:光吸收程度A和吸收层厚度L、吸收物浓度C之间的关系。

A=K×C×L      K为吸光系数

 K=A/C×L

9.电泳:带电质点在电场力的作用下发生定向移动的现象。

10.电泳技术:利用电泳现象进行物质分离、纯化及鉴定的技术。

11.迁移率M:指带电质点在单位电场强度下的电泳速度。  (公式P31)

12.离心技术:根据不同物质的沉降系数、密度不同,在同一转速、同一部位受到的离心力不同而出现不同的沉降速度,从而达到浓缩、分离纯化的目的。

低速<6000rpm

     中速6000-15000rpm

 高速>15000rpm


实验一:双缩脲法测定蛋白质含量

蛋白质的双缩脲反应:蛋白质中的肽键在碱性溶液中能与铜离子作用产生紫红色络合物,此反应和双缩脲在碱性溶液中与铜离子作用生成紫红色反应相似,故称双缩脲反应。

◎蛋白质浓度(g/L=蛋白质含量(mg×10-3/0.1mL×10-3

◎人正常浓度60-80g/L


实验三:紫外光分光光度法测定蛋白质含量

◎根据蛋白质中酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸在280nm具有吸收峰进行定量,将样品直接放到紫外管分光光度计上进行测定。

Lowry-Kalcker公式:蛋白质浓度(mg/mL)=(1.45A280-0.74A260)×500


实验六:血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳

◎蛋白质为两性电解质,其氨基酸残基上含有可解离的酸性或碱性基团,在pH不同的溶液中可进行酸性或碱性电离。

等电点:在某一pH的溶液中,氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等,所带净电荷为零,呈电中性,此时溶液的pH称为该氨基酸的等电点。

血清中各主要蛋白质的等电点均低于pH8.6以醋酸纤维素为支持介质,电泳分离后经染色处理可将血清蛋白质分成五条主要条带,从正极起依次为

白蛋白,α1—球蛋白、α2—球蛋白、β—球蛋白、γ—球蛋白


实验九:氨基酸薄层分析

◎吸附薄层层析是将吸附剂等材料均匀地铺在玻璃板或其他薄板上,形成薄层然后在上面进行层析的方法。吸附剂-硅胶,展开剂-正丁醇+冰乙酸+

◎染色:茚三酮,氨基酸显色反应

Rf=原点到斑点距离/原点到展开剂前沿距离


实验十四:碱性磷酸酶ALP的动力学分析

◎底物磷酸苯二钠---------ALP水解------生成游离酚+磷酸盐------酚在碱性环境与4-氨基安替◎比林作用、经铁氰化钾氧化-----------生成红色醌衍生物-----比色测定

◎酶本质是蛋白质

酶促动力学是研究pH、温度、底物浓度、抑制剂等对酶活性的影响。

◎人体内大多数酶最适pH6.0-8.0,胃蛋白酶1.5-2.0ALP8.6-10.0.

酶活性单位:100ml酶液在37℃保温下15min产生一个酚者。

酶抑制剂:凡降低酶活性的物质。分为可逆性和不可逆性可逆性又分为竞争性和非竞争性。

◎底物浓度[S]与酶促反应速度V关系【米氏方程】:

V=Vm[S]/(Km+[S])     Km为米氏常数

双倒数法Lineweaver-Burk


实验十五:测定血糖及激素对血糖浓度的影响

葡萄糖氧化酶法GOD-POD法:葡萄糖氧化酶(GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸,并释放过氧化氢。过氧化物酶(POD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧,并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。

◎测定管血糖浓度(mmol/L=测定管吸光度/标准管吸光度  ×5mmol/L

文字来源:李婷婷

图文编辑:李婷婷

审核:黄娇娇


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