蛋白质质谱分析

2023-05-10 14:56:27

技术简介

质谱技术具有较好的灵敏度、准确度,能准确测定蛋白质。目前质谱主要测定蛋自质一级结构包括分子量、肽链氨基酸排序及多肽或二硫键数目和位置,在对蛋白质结构分析的研究中占据了重要的地位。
蛋白质质谱分析的一般过程如下:首先,通过实验准备所需的样本细胞,再经过分离提纯得到蛋白样本。使用胰酶消化蛋白形成短肽,再通过质谱仪检测多肽的指纹图谱。最后分析图谱,鉴定得到蛋白质。
用于质谱分析蛋白质的方法主要有三种:肽质量指纹图谱法(PMF)、串联质谱法(CID)和梯形肽片段测序法(ladderpeptide sequencing)。


应用领域
蛋白质序列从头测序
多样本中的蛋白质鉴定
差异蛋白质组研究
肽段分子量及氨基酸组成研究
蛋白质翻译后修饰位点鉴定


技术路线

信息分析


上图是针对质谱数据的常规分析流程:
(1)蛋白质经过酶解后,送入质谱仪,得到一级质谱。从一级质谱鉴定蛋白质的主要方法是通过多肽质量纹。
(2)在一级质谱图中,选择其中的一个峰(母离子),再把这个峰对应的离子打碎(可采用串联质谱法),检测碎片离子的质荷比,就得到一张二级质谱图。
(3)二级质谱图可以采用手工鉴定法确定肽段序列,即使用传统的九步鉴定法。
(4)但是,在实际情况中,单从质谱图不一定能得到全序列。这时,可以用数据库搜索策略进行辅助鉴定。利用匹配算法,可以搜索最好的匹配质谱图的多肽。
(5)过上述二级质谱数据库搜索算法及手工鉴定算法就可以完成谱图中蛋白样本的高通量鉴定。


送样要求
1、样品来源:考染蛋白质全部接受;银染的蛋白质不得使用戊二醛作为固定剂;蛋白质干粉;蛋白质溶液等。
2、寄送要求:蛋白质条带和干粉可用冰袋包装寄送,蛋白质溶液需用干冰或液氮包装寄送,样本应避免各类污染和反复冻融。


项目运转周期
质谱项目运转周期约为45天。

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