你不知道的哥家蛋白免疫印迹《七绝谱》

2023-05-10 14:56:27

哥家

《七绝谱》

能够在9月开学季观看阅兵式确实是快哉！怎样怀着愉悦的心情从事神圣伟大的Western Blotting事业，必须向哥家生命科学的Amersham和Whatman这两位上仙求得一本正解！为什么只有哥家才是正解呢？ 1975年，该方法的创始人E.D. Sourthen教授就是在一张Whatman的NC膜上获得了灵感，并采用Amersham的ECL化学发光剂，才有了今天几乎每一个生命科学实验室都在经历的Western Blotting，从那时起该方法成为分子生物学、生物化学和免疫遗传学中基本功，但也是极上乘的法力！也许你知道哥家的Typhoon, LAS和Imager，但你或许未曾听过这本《七绝谱》!


花千骨
我真的遇到很多问题，Amersham和Whatman两位上仙是否有解呢？
我有正解，你需要一本蛋白免疫印迹《七绝谱》，才能借助哥家的洪荒之力来破！
白子画

Q
A
&
1
分子量小的蛋白转印效率低，怎么办？
原因通常是小蛋白在普通转印膜上结合量少，缓冲液残留SDS影响蛋白与膜的结合或结合时间不够，但关键还在于前者。使用结合能力更高的Hybond印迹膜，或Protran系列中0.1um或0.2um的印迹膜，可大幅提高转印效率，帮你获得更全面地印迹结果。

2
蛋白图谱扫完之后发现背景很高，看不清目标蛋白信号？
应该是印迹膜选型不合适、二抗浓度太高、封闭不足或其与抗体交叉反应。如果你只知道只有0.45um的PVDF膜这一种，那你out了！Amersham转门提供极低背景的Protran Premium或 Hybond LFP印迹膜，还提供最高质量ECL封闭剂、HRP标记鼠抗/兔抗和荧光标记二抗试剂，最大程度减少封闭不足和避免交叉反应，确保一个纯净的背景。

3
印迹膜上蛋白条带出现smear拖尾，或有些地方根本没有蛋白？
应该是凝胶和膜接触不好和转印过程过热所致，最简单的办法是接触紧密排除所有气泡，可以使用较厚的3MM或GB005印迹纸（厚度分别为0.34毫米和1.5毫米），或增加印迹纸的数量，还可以同时运用内置热交换器的Amersham TE22槽式电转印仪，避免过热现象。

4
当采用稀释的一抗和二抗时，最后化学发光时间和信号强度总是不理想？
这是关于化学发光剂选型的问题，Amersham ECL共有五大系列的发光液供选择，其中ECL Prime灵敏度至1pg，信号持续时间达24h，允许高度稀释的一抗和二抗，助力提高检测效率。其他如Start，ECL，Select, Plex等系列发光液，实现从高丰度、中丰度至极低丰度或多重组合及亚型的研究。

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