精准医疗 AWB助力修饰蛋白检测

2023-05-18 23:00:13


蛋白翻译后修饰


精准医疗的基础是疾病形成的机制是清楚的,蛋白翻译后修饰往往与信号通路调控,疾病的发生和控制息息相关,对于理解疾病形成机制有重要的作用。

常见蛋白翻译后修饰有磷酸化,乙酰化,甲酰化等,具有重要的生物学功能,通常使用Western Blotting对其修饰程度进行检测和定量分析。


如何检测?

蛋白在修饰前后,分子量几乎没有差别,在电泳检测中重合为一条带。当采用化学发光检测时,往往需要在同一张膜上进行抗体的剥离和再杂交,操作复杂,且容易出现交叉污染,导致定量不准确

荧光Western Blotting采用荧光标记二抗,在同一张膜上,用不同种属来源的一抗分别识别总蛋白和磷酸化蛋白,再用不同颜色(Cy3/Cy5)标记的二抗孵育,轻松检测相近或相同分子量的两种蛋白。



AWB一体化蛋白免疫
印迹系统


1
红绿双通道激光检测系统
独立的Cy3通道和Cy5通道扫描头,避免信号间交叉干扰。逐点扫描技术,灵敏度6级可调,微弱信号也能检测。5OD动态范围,同时定量强弱信号哦。

2
 快速
从电泳-转印-孵育-成像,一气呵成,4h完成WB

3
 定量准确
标准化成就准确定量,批间变异系数CV<10%,定量结果更准确。



2-D Western Blotting 
带你看得更多

2-D 双向电泳技术,结合Western Blotting检测修饰蛋白,提高了蛋白分离的分辨率,带你看得更多。


GSK蛋白(糖原合成酶激酶-3)是一种多功能的丝氨酸/苏氨酸激酶,分为α,β两种异构体。研究主要集中在GSK3β,其参与多条信号转导通路,与2型糖尿病,阿尔兹海默病,癌症等密切相关。在人前列腺癌细胞中利用Western Blotting检测GSK3β的磷酸化水平,在1-D和2-D图中,Cy3(绿色)检测总GSK3β蛋白,GSK3α也能够被GSK3β抗体非特异结合,Cy5(红色)检测Ser9位点磷酸化GSK3β蛋白。在2-D Cy3图中,可以看到GSK3β有一串点向左,也就是酸性端延伸,代表GSK3β蛋白有多重修饰,每向酸性端移动一个点表明多一个磷酸修饰,表面GSK3β有5种不同的磷酸化修饰程度。2-D Cy5特异性检测Ser9磷酸化抗体的图中,可以看到仅有2种磷酸化形式修饰在ser位点上,从overlay图片中可以看出,是磷酸化修饰最多的两个亚型。 

2-D Western Blotting能够更清晰的看到蛋白磷酸化的状态和数量,获得更多信息。

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