蛋白质盐析与透析
一、 目的
学习盐析与透析的基本原理和操作。
二、 原理
向蛋白质溶液中加入大量中性盐可使蛋白质的溶解度降低从溶液中析出,这种现象称为盐析。
蛋白质是大分子物质,不能透过透析膜而小分子物质可以自由透过。在分离提纯蛋白质的过程中,常利用透析的方法使蛋白质与小分子物质分开。
三、 实验步骤
1. 透析袋(前)处理:先将一适当大小和长度的透析管放在1mol/L EDTA溶液中,煮沸10分钟,再在2% NaHCO3溶液中煮沸10分钟,然后再在蒸馏水中煮沸10分钟即可(已做)。
2. 取5ml蛋白质溶液于离心管中,加4g硫酸铵粉末,搅拌使之溶解。然后在4℃下静置20分钟,出现絮状沉淀。
3. 离心:将离心管在4000转/分的速度下离心20分钟。
4. 装透析袋:离心后倒掉上清液,加5ml蒸馏水溶解沉淀物,然后小心倒入透析袋中,扎紧上口。
5. 将扎好的透析袋放入盛有蒸馏水的烧杯中,进行透析,并不断搅拌。
6. 每隔适当时间(5分钟),将氯化钡滴入烧杯的蒸馏水中,观察是否有沉淀现象。
7.解释实验现象。
四、注意事项
1. 离心机配平。
2. 透析袋口要扎紧。
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