利用沉淀实验测定蛋白质等电点

2023-05-10 14:56:27

利用沉淀实验测定蛋白质等电点


一、蛋白质等电点的测定

1、目的

(1)了解蛋白质的两性解离性质。

(2)学习测定蛋白质等电点的一种方法。

2、原理

蛋白质是两性电解质。蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱 度影响。当溶液的pH 达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等， 在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH 值称 为此种蛋白质的等电点。不同蛋白质各有其特异的等电点。在等电点时，蛋 白质的理化性质都有变化，可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电 点。最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH 值。

本实验借观察在不同pH 溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。用醋 酸与醋酸钠(醋酸钠混合在酪蛋白溶液中)配制成各种不同pH 值的缓冲液。 向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的pH 值即为酪蛋白 的等电点。

3、器材

(1)水浴锅(2)温度计(3)200mL 锥形瓶

(4)100mL 容量瓶(5)吸管(6)试管

(7)试管架(8)乳钵

4、试剂

(1)0.4%酪蛋白醋酸钠溶液200mL

取0.4g 酪蛋白，加少量水在乳钵中仔细地研磨，将所得的蛋白质悬胶 液移入200 mL 锥形瓶内，用少量40～50℃的温水先洗涤乳钵，将洗涤液也 移入锥形瓶内。加入10mL1mol/L 醋酸钠溶液。把锥形瓶放入到50℃水浴中， 并小心地旋转锥形瓶，直到酪蛋白完全溶解为止。将锥形瓶内的溶液全部移 至100mL 容量瓶内，加水至刻度，塞紧玻塞，混匀。

(2) 1.00mol/L 醋酸溶液100mL

(3)0.10mol/L 醋酸溶液100mL

(4)0.01mol/L 醋酸溶液50mL

5、操作

(1)取同样规格的试管4 支，按下表顺序分别精确地加入各试剂，然后混匀①。

(2)向以上试管中各加酪蛋白的醋酸钠溶液1mL,加一管,摇匀一管。此时1、 2、3、4 管的pH 依次为5.9、5.3、4.7、3.5。观察其混浊度。静置10 分 钟后，再观察其混浊度。最混浊的一管的pH 即为酪蛋白的等电点。

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