Wes: Science基因编辑文章中的蛋白质定量检测技术

裘馨氏肌肉营养不良症（DMD）是一种进行性肌肉变性病，病因是由于基因点突变、缺失，或导致DMD基因的重复，基因转移及蛋白表达缺失等。

由于基因突变缺陷导致肌肉细胞不能正常产生一种称为Dystrophin的蛋白质，会使钙离子渗入细胞，引发瀑布反应，导致患者全身肌肉无力，又因肌肉细胞内缺少Dystrophin，导致细胞组织肌肉纤维变得无力且脆弱，经长期的伸展后该缺失肌肉细胞组织将产生机械性伤害..等等因素而破坏，最终导致肌肉细胞死亡。大约65%的病例是经由性染色体隐性遗传而来；35%的病例则由于基因突变而来。

因而通过基因编辑可能可以逆转此类疾病。

哈佛大学干细胞及生殖医学系Amy J. Wagers教授研究组，2017年在Science发表文章：

In vivo gene editing in dystrophic mouse muscle and muscle stem cells。

文章中，作者使用(CRISPR)–Cas9编辑技术进行细胞系及小鼠注射基因编辑，发现可以有效逆转，恢复肌纤维基本功能。

In this study, we developed and tested a direct gene-editing approach to induce exon deletion and recover dystrophin expression in the mdx mouse model of DMD. Delivery by adeno-associated virus (AAV) of clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)–Cas9 endonucleases coupled with paired guide RNAs flanking the mutated Dmd exon23 resulted in excision of intervening DNA and restored the Dmd reading frame in myofibers, cardiomyocytes, and muscle stem cells after local or systemic delivery.

Dystrophin作为研究中的最关键蛋白，则使用ProteinSimple Wes全自动定量蛋白质检测技术来完成。Vinculin为内参蛋白。

此外，Dystrophin分子量达427KD，传统western blot需要花费大量时间进行胶，转膜等条件等优化，且很难拿到理想结果。如上图，Wes可以全自动完成Dystrophin检测，条带非常干净，无拖尾等，对于准确定量检测极其重要。

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