相互作用,p53癌症蛋白研究鼻祖如何做

相互作用，包括蛋白-蛋白相互作用、DNA-蛋白相互作用、抗体-蛋白相互作用、多肽-蛋白相互作用等，在生命活动中起着核心作用，例如：DNA复制、基因转录激活、生命代谢过程、产物分泌、能量产生和消耗、信号转导、病毒感染、机体对病毒的防护、细胞周期调控等等众多生命过程中均涉及。

对相互作用的研究能够从分子水平上揭示蛋白质功能，帮助揭示生长发育、新陈代谢、分化和凋亡等细胞活动规律。正确理解交互作用也为探讨疾病机理、疾病治疗、疾病预防以及寻找药物靶点和进行理性的药物设计等方面提供了重要的理论基础。

Sir David Lane，17年度新加坡总统科学技术奖获得者(PSTA)——授予新加坡研究科学家和工程师的最高荣誉，表彰他们为国家带来了重大的科学、技术或经济利益。目前也担任Sengenics公司科学咨询委员。

Sir David Lane在新加坡最大的科学技术研究机构A*STAR创建并领导了p53实验室。1979年，Sir David Lane在p53致癌基因的里程碑式发现中发挥了重要作用，随后的近30年的研究使p53从最初发现走向临床。这一发现使人们发现了许多抗癌药物的重要靶点，其中之一就是利用抗体和多肽来治疗癌症。

Sir David Lane的p53研究中，采用Sengenics品牌的p53定制蛋白芯片研究p53蛋白与DNA结合关键位点，研究突变对p53蛋白的折叠结构影响，研究突变对p53蛋白与MDM2癌蛋白结合活性的影响，研究药物对p53突变蛋白的还原作用，研发癌症治疗新药物：

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研究目的：研究突变对p53蛋白与DNA结合能力的影响，找出关键结合位点

研究平台: Sengenics p53 突变蛋白芯片

方案设计: 定制芯片上包被有不同突变位点的p53蛋白，将Cy3荧光染料标记的GADD45 DNA与芯片孵育，发现突变对p53蛋白与DNA结合能力的影响，找出p53蛋白与DNA结合的关键位点。

研究结论:发现p53不同突变蛋白和DNA的差异结合活性，发现p53蛋白与DNA结合的关键位点，为抗癌药物的开发寻找到新靶点。

也同时验证了sengenics公司的专利KREX蛋白表达技术能保证芯片上蛋白均是有功能活性的。

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研究目的：测量突变对p53折叠结构的影响

研究平台： Sengenics p53 突变蛋白芯片

方案设计:

mAb抗体可以识别p53蛋白的线性表位；

PAb1620抗体只能识别 p53蛋白的不连续表位/构象表位，因此它的结合体现在p53其折叠结构的中心区域；

分别用两种抗体与p53突变蛋白芯片孵育。

实验结论：

mAb与芯片上p53不同突变位点蛋白作用，并没有显示出结合差异；

PAb1620与芯片上p53不同突变位点蛋白作用，显示出结合差异；

发现突变对p53折叠结构的影响的关键位点。

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研究目的：研究临床相关突变对p53蛋白的MDM2癌蛋白结合特性的影响

研究平台: Sengenics p53 突变蛋白芯片

研究设计&研究结论:

用Cy3标记的MDM2癌蛋白与p53突变蛋白芯片孵育，发现p53突变蛋白的差异蛋白结合活性，其中W23A的突变对p53蛋白与MDM2癌蛋白的结合影响较大；

再通过Bead-based pull-down assay实验验证：

通过对表达FLAG-MDM2和p53（野性&W23A突变型）蛋白的裂解液混合液进行免疫共沉淀，对试验后溶液进行WB实验，验证了W23A突变对p53蛋白与MDM2癌蛋白结合的影响。