IP、co-IP、ChIP、RIP、pull-down了解一下?

2023-05-10 14:56:27

 IP、co-IP、ChIP、RIP、pull-down,这么多单词还分得清吗?这些技术能用来做什么都了解过吗?


以上几个实验技术都和蛋白有关,他们之间既有联系又有区别。今天小编主要介绍一下这几个实验技术,嗯,都是知识点

免疫沉淀技术


免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)主要原理是根据抗原和抗体的特异性结合,利用抗体将靶标蛋白(即抗原)分离出来,只是为了检测某一种蛋白的表达情况。co-IP、ChIP、RIP等技术由IP演化而来,可以用来研究与蛋白结合的分子。



免疫共沉淀技术


免疫共沉淀技术(co-Immunoprecipitation, co-IP)是一种研究两种蛋白在体内是否存在相互作用的有效方法,通过抗体和已知蛋白结合,从而捕获整个已知蛋白复合物,进而研究复合物中与已知蛋白存在相互作用的蛋白。


IP和co-IP的区别在于检测的最终目标是直接与抗体结合的蛋白,还是间接与抗体结合的蛋白。


染色质免疫共沉淀技术


染色质免疫共沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)是用来研究蛋白质与DNA是否在体内存在相互作用,常用来检测转录因子结合位点。利用抗原抗体的特异性结合,将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来,能够真实地反映结合在DNA序列上的调控蛋白。


一般包括:细胞固定---染色质断裂---染色质免疫沉淀---交联反应的逆转---DNA的纯化及鉴定。可以用PCR或者高通量测序鉴定DNA与蛋白质的结合情况。



RNA结合蛋白免疫沉淀技术


RNA结合蛋白免疫沉淀技术(RNA Binding Protein ImmunoprecipitationAssay,RIP)主要是用来研究体内、RNA与蛋白结合情况,利用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,通过分离纯化,对结合在复合物上的RNA 进行RT-PCR验证或测序分析。



Pull-down实验


主要原理是利用带有标签的已知蛋白作为诱饵蛋白(最常用的是GST标签,即谷胱甘肽巯基转移酶,glutathione S-transferase),诱饵蛋白特异性结合谷胱甘肽亲和树脂,当目的蛋白溶液过柱时,将诱饵蛋白及其相互作用的蛋白复合物捕获。复合物洗脱后,通过蛋白凝胶电泳分析两种蛋白间的相互作用,或者筛选相应的目的蛋白。



RNA pull down实验


顾名思义,是研究RNA与蛋白质相互作用的一种技术。利用生物素标记的RNA探针,通过与含有目的蛋白的溶液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。


复合物可以特异性结合磁珠,从而与孵育液中的其他蛋白分离。复合物洗脱后,通过蛋白凝胶电泳实验,检测特定的RNA与蛋白的结合情况。


co-IP和pulldown区别


co-IP研究的是体内自然状态下的蛋白质互作,反应地是比较真实的蛋白质之间的相互作用,而pull down则是通过体外实验,无法得知体内真实的结合情况。


co-IP由于沉淀下来的是蛋白复合物,所以不能显示蛋白质之间的相互作用是直接还是间接的,而pull down可以确定目的蛋白和检测蛋白是否可以发生直接相互作用。


今天的内容就到这啦~

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