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接种后适应期太长
1)种子活性太低
策略:调大种子的OD值,是种子处于对数生长期初期
2)接种量太小
策略:适当加大接种量(根据经验值)
3)菌种老化
策略:更换感受态细胞重新转导(初次发酵),降低种子OD值(非初次发酵)
4)染菌
策略:根据染菌程度做处理
接种后,生长一段时间后停止生长,过一段时间又生长
1)自诱导
策略:优化培养基:改变培养基组成或者调整各组分的比例(一般调整氮源,一般调整酵母粉的比例,自诱导主要是酵母粉里的乳糖引起)
接种后,生长一段时间后停止生长且OD值开始下降(自溶)
1)感染噬菌体
策略:确定噬菌体感染的原因。种子浸染,需重新克隆菌种;培养基感染可换另外的菌种试验;发酵罐空气进罐过滤器感染,需更换过滤器且对发酵罐及管理进行化学消毒除了。另外浸染噬菌体需要停止发酵,并对发酵环境,物料等做全面的清洁灭菌处理。
2)补料C,N比不合适
策略:由于补料C,N比不合适引起的自溶过程比较缓冲,优化补料配方。
3)菌种老化及保存不当
策略:生长缓慢,且自溶的过程比较缓慢,此时需要重新克隆菌种。
4)染菌
策略:报废处理,且严格无菌操作。
发酵过程中pH迅速下降且溶氧下降
1)C源的消耗乳酸的生成
策略:补碱,调转速和通气量及罐压
发酵过程中pH迅速上升且溶氧上升
1)C源不足,并消耗乳酸
策略:补C源
调升pH时菌的生长变慢
1)pH调节剂浓度太高或者调节过程太快
策略:降低调节剂的浓度,降低调节剂的流加速度
补料后pH还在上升且溶氧上升
1)补料速度太慢
策略:加快补料速度或调高补料浓度
补料后pH下降太快溶氧不变
1)补料速度太快
策略:降低补料速度或调低补料浓度
补料后菌的增殖变慢
1)产生葡萄糖效应
策略:降低补料速度或调低补料浓度,同时也可更换C源
诱导后不表达
1)诱导时间不合适
策略:调整诱导时间(一般是诱导的过早,菌还处于对数生长期前期,致使诱导后菌的生长速度太大,繁殖过程中质粒丢失)
2)诱导剂浓度不合适
策略:调整诱导剂浓度
3)诱导条件不对
策略:优化诱导温度,诱导时间
4)质粒丢失
策略:重新克隆,并用选择性培养基筛选稳定克隆
5)克隆基因序列不合适
策略:优化克隆基因序列,优化启动子,密码子(在定点突变时常发生)
诱导后表达量太低
1)诱导的太晚
策略:调整诱导时间(一般使诱导时菌处于对数生长期末期)
2)诱导条件不合适
优化优点条件,如温度,诱导剂浓度等
诱导时间点的确定
1)跟俊OD值确定菌的生长状态
策略:根据OD值的变化确定菌的生理状态,使诱导时间点菌处于对数生长期末期
发酵过程发生异常
应根据pH,DO,OD等变化综合分析!
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