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建立一个分子生物学实验室所需的仪器

新疆美顺达 2019-03-12 07:02:24

一、 上游分子克隆 

分子克隆技术是分子生物学的核心技术,这项技术的主要目的是获得某一基因或DNA片段的大量拷贝,从而可以深入分析基因结构与功能,并可达到人为改造细胞及物种个体的遗传性状的目的。 

1. 分子克隆的基本技术路线: 

1) 分离制备目的基因或DNA片段; 

2) 目的DNA与载体在体外进行连接; 

3) 重组DNA分子转入宿主细胞; 

4) 筛选及鉴定阳性重组体; 

5) 重组体的扩增。 

2. 分子克隆常用仪器:

二、 核酸分子杂交 

核酸分子杂交技术是分子生物学领域中最常用的技术之一。其基本原理是具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下可按碱基互补原则形成双链。 由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的高度灵敏性,使其在分子生物学领域中被广泛应用于分子克隆的筛选,基因组中特定基因序列的定量定性检测,基因表达和基因突变分析及疾病的基因诊断等。根据核酸种类分为Southern印迹法和Northern印迹法。   核酸分子杂交中常用的仪器:

三、 下游蛋白的表达及分离纯化 

目的基因能否发挥其效应,只能通过其表达有功能的蛋白质来实现,因此蛋白质的表达及分析方法成为分子生物学中必不可少的组成部分。 

1. 蛋白的表达 

大肠杆菌是自然界中最为人知的生物体之一。由于其具有操作简易,产量高和成本低廉等优点,使其成为蛋白质表达的首选宿主。缺点是:表达缺乏翻译后加工,得到的蛋白可能缺乏某些天然蛋白所具有的活性。 

酵母作为单细胞低等真核生物,具有易培养,繁殖快,便于基因操作等优点,渐渐被开发作为目的基因的表达系统。其中甲基酵母作为外源基因的表达系统,可以真实地表达目的基因且能分泌产物到培养液中,有利于纯化等特点被广泛的应用。 

动物细胞表达系统的优点是:表达产物经过正确修饰,一般具有天然活性,但操作复杂,表达量较低,成本较高。所有的表达系统均各有利弊,需根据实验或生产需要加以选择。 

2. 蛋白质表达所需仪器

3. 目的蛋白的分离与纯化所需仪器 

蛋白质的分离纯化是研究蛋白质化学组成,结构及生物学功能等的基础。遗传工程中,下游的处理和分析鉴定,基因工程产品的制备都需要纯度较高的蛋白质。

来源:实验室设计与建设


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