做过Western-Blot的童鞋知道，分子量小于30KDa的蛋白分子不容易做，会经常被小分子蛋白折磨的是遍体鳞伤。小分子蛋白虐我千百遍，我待小分子蛋白如初恋。在此，小编总结了各种小分子蛋白达人们的经验之谈，供有需求的童鞋参考。
1、提蛋白的过程尽量在30分钟之内完成，提完蛋白立即加入上样缓冲液煮沸（煮沸的时间长一点，一般20分钟），准备好蛋白样品后立即电泳。（小分子蛋白容易形成多聚体，这样可以大大减少多聚体的形成）。
2、电泳时时间要足够长。建议先用60-80V电压跑完浓缩胶，再以100-120V电压跑分离胶，溴酚蓝电泳至玻璃板底部。电泳时尽量在冰水浴中进行。最好用1mm和1.5mm厚的胶（若用0.75mm厚的胶时要适当缩短转膜时间）。
3、转膜时，尽量用湿转法（半干转也可以，但是容易转过）。转膜缓冲液中，甲醇浓度要达到20%。PVDF膜，用0.22微米的膜。转膜时间需要实验摸索。
4、一抗孵育因为多数小分子蛋白的表达量较少，一般孵育时间要长，建议24小时以上，甚至可以延长孵育48个小时，需要在4°C冰箱内进行。
以上方法适用于分子量在20-30KDa的蛋白。若蛋白分子量小于15KDa，则不用SDS-PAGE凝胶电泳（蛋白与SDS共迁移，影响分离度，得不到很好的分离效果），应该采用Tris-Tricine缓冲系统与Tricine分离胶。
需要注意的是，Tricine电泳时，蛋白样品用Tricine样品缓冲液处理，加样前在37-40℃水浴中处理一个小时（不要煮沸！不要煮沸！不要煮沸！重要的事情说三遍）。内槽中加满阴极缓冲液，外槽中加满阳极缓冲液（千万不要加反了。否则蛋白全部进入缓冲液！）。
最后，祝做小分子蛋白的童鞋实验之路顺利，早日做出满意的结果。
（部分内容转自网络）