蛋白质含量测定
下列测定蛋白质含量的方法中,需要完整肽键的是( )
A.双缩脲反应
B.凯氏定氮法
C.紫外光吸收法
D.茚三酮反应
E.奈氏试剂
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A
为什么
凯氏定氮法:
将有机氮都转变成无机铵盐,然后在碱性条件下将铵盐转化为氨,随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收,再以标准碱滴定。
紫外光吸收法:
蛋白质分子中,酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残残基的苯环含有共轭双键,使蛋白质具有吸收紫外线的性质,在280nm处有最大光吸收,其吸光度与蛋白质含量成正比。各种蛋白质的这三种氨基酸的含量差别不大,因此测定蛋白质溶液在280nm处的吸光度值可以反映蛋白的浓度。
茚三酮反应:
所有氨基酸及具有游离α-氨基和 α-羧基的肽与茚三酮反应都产生蓝紫色物质,其中脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生(亮)黄色物质。
奈氏试剂:
碘离子和汞离子在强碱性条件下,会与氨反应生成淡红棕色络合物,此颜色在波长420nm处会有强烈的吸收。而生成的这类红棕色络合物的吸光度会与其溶液的氨氮含量成正比,可用测试反应液的吸收值而测定氨氮的含量。
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