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不得不承认Bio-Rad V3 Western Blot流程确实提高了实验效率，让Western Blot更简单轻松，在这之中我们不能忽略的一个方法便是，Bio-Rad V3 Western Blot流程所使用的蛋白定量方法和传统的定量方法是有很明显的差异的。
1、传统蛋白定量方法之——看家蛋白定量
（1）看家蛋白的线性范围窄：
HKP 通常是高丰度蛋白，其信号通常会接近动态线性范围上限。而当我们要检测低丰度蛋白，从而上样量很大的时候，actin、tubulin、GAPDH抗体产生的信号已经不能反映上样量的差异了。
（2）看家蛋白线性动态范围窄：
（3）看家蛋白在个别情况下表达不恒定：
2、Bio-Rad V3 WesternBlot蛋白定量方法之——总蛋白定量
（1）总蛋白线性更宽，表达量相对恒定
（2）总蛋白定量方法是被认可的方法
（3）总蛋白定量作为loading control：能真实反映蛋白上样量；比HKP的线性度更好；文献报道的使用总蛋白做loading control的优势：
Sypro Ruby, Amido Black J Neurosci Methods. 2008 Jul 30;172(2):250-4.
Ponceau S Anal Biochem. 2010 Jun15;401(2):318-20
SYPRO Ruby- and Flamingo , Anal Biochem.2010 Feb 15;397(2):262-4.
Coomassie J Proteome Res. 2011 Mar4;10(3):1416-9.
Stain-Free gels Anal Biochem. 2012 Aug26;430(2):108-110
（4）免染总蛋白的线性范围：
3、看家蛋白与免染总蛋白的线性范围比较：
4、免染总蛋白定量与看家蛋白定量的差别——实例比较
结论：
（1）Hsp70在24h内的表达量变化情况，温度在2.5-5内升高后保持不变
（2）Hsp70蛋白表达量应随温度升高而增加
（3）以TPN为内参来定，Hsp70表达量5h~24h内并不会下降
（4）以actin为内参定量，Hsp70在5h~24h内变化规律不一致
所以简单的说，Bio-Rad V3 Western Blot流程使用总蛋白定量的方法让Western Blot定量更准确和稳定，也保证了V3的定量快速而准确。