糖化血红蛋白检测方法的再回顾 (二)检测方法

2023-05-10 14:56:27

前篇回顾

不同方法学最终给出的HbA1c结果必须是一致的且可溯源的。而“金标准”指的是HbA1c检测,而非某种方法学。临床一旦确认HbA1c受到了变异体的干扰,那么就不能再用HbA1c作为长期血糖的标志物使用了。


前言

HbA1c的检测方法按照原理分为两大类:1,各组分蛋白所带电荷不同,如离子交换色谱法,毛细管电泳法;2,是基于蛋白的结构不同,如免疫法,亲和层析法。

这里我们换一种思路,我们把方法学分为变异体不可识别方法和变异体可识别方法。

变异体不可识别方法

变异体不可识别方法指的是只提供数字结果,无法提供图谱结果,例如免疫法,亲和层析法。这些方法的特征是原理/计算公式不受大部分变异体的影响,但是从它所提供的数字结果上是无法知晓是否存在变异体。

免疫法

免疫法主要依靠抗原抗体反应,以糖化血红蛋白作为抗原进行测定。由于这个免疫方法只能提供数值,即便受到变异体干扰导致结果偏低或者偏高,实验室也无从得知。它的计算公式通常是

HbA1c%=HbA1c/总血红蛋白

 

亲和层析法

首先,亲和层析检测的是总的糖基化血红蛋白,其中包括除A1c以外其他蛋白,例如HbF,HbA2。其结果一个峰为非糖基化血红蛋白,另外一个峰位糖基化血红蛋白,并不显示A1c峰。它的计算公式通常是

糖基化血红蛋白% = 糖基化血红蛋白/总血红蛋白

在变异体存在的情况下,亲和层析仍然只分离糖基化血红蛋白(包含糖基化变异体)和非糖基化血红蛋白(包含非糖基化变异体),因此无法提示变异体的干扰。


HbS变异体-左图为亲和层析法,右图为毛细管电泳法


变异体可识别方法

变异体可识别方法指的是不仅提供数字结果,并且提供图谱结果,例如离子交换,毛细管电泳法。

离子交换法

该方法学是NGSP的参考方法学。它的计算公式通常是

HbA1c%=HbA1c峰面积/所有峰总面积

离子交换对于部分变异体可以从图谱上发现,但是市场上很多仪器只有快速检测,虽然检测速度快,但同时也降低了分辨率。

当血红蛋白变异体的峰出现,那么异常峰形就会影响公式计算,出现偏高或者偏低的HbA1c结果。如下图所示,与异常峰与HbA1c峰重叠会造成结果升高,与HbA0峰重叠会造成结果降低等。


以下为HbE样本的离子交换法检测实例,图谱解读对于实际使用者而言非常困难。


毛细管电泳法

该方法学是IFCC的参考方法学。它的计算公式是:

HbA1c%=HbA1c/(HbA1c+ HbA0)

该计算公式与IFCC参考方法学一致。另外,由于毛细管电泳的分离品质较高,因此与其他方法学相比,对于变异体的有极强的分辨能力。

总结

随着临床专家逐渐认识到血红蛋白变异体对于HbA1c这个标志物本身的影响,越来越多的HbA1c研究计划都将毛细管电泳方法学纳入其中。上海中山医院牵头的中国糖化血红蛋白一致性研究中,就要求约40家省级参考实验室需要配备毛细管电泳方法。

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