【质量】Mr.DDGS论质量检测之国家标准和国际标准(蛋白)

饲料中粗蛋白测定方法G B / T 6 4 3 2-9 4

1.主体内容与适用范围

本标准规定了饲料中粗蛋白含量的测定方法。

本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。

 

2引用标准

G B 6 0 1化学试剂滴定分析(容量分析)用标准溶液的制备。 

 

3原理

  凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出 ，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25 ，计算出粗蛋白含量 。

 

4 试剂 

4 . 1 硫酸( G B 625 ) : 化学纯 ，含量为9 8 %，无氮。 

4.2混合催化剂:0.4g硫酸铜，5个结晶水( GB 665) , 6 g硫酸钾( HG 3- 920 ) 或硫酸钠( HG 3 - 908) ,均为化学纯，磨碎混匀。 

4 . 3 氢氧化钠( G B 629 ) : 化学纯，4 0 %水溶液( M /V ) 。 

4 .4 硼酸( GB628 ) : 化学纯，2 %水溶液( M /V ) 。

4.5混合指示剂: 甲基红( HG3-958) 0.1 %乙醇溶液，溴甲酚绿( HG 3-122 0 ) 0.5 %乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。

 

4 . 6 盐酸标准溶液: 邻苯二甲酸氢钾法标定，按G B 6 0 1制备。

4.6.1  0.1mol/盐酸( HCl) 标准溶液: 8 . 3 m L盐酸( G B 6 2 2 ) ，分析纯，注入1000ml蒸馏水中。 

4.6.2  0.02 m o l / L 盐酸( H C l ) 标准溶液: 1 . 6 7 m l 盐酸( G B 6 2 2 ) ，分析纯，注入1000 m l 蒸馏水中。 

4 . 7 蔗糖( H G 3 -1 0 0 1 ) : 分析纯。 

4 . 8 硫酸铵( G B 1 3 9 6 )  分析纯，干燥。4 . 9 硼酸吸收液: 1% 硼酸水溶液1000 ml，加入0.1%溴甲酚绿乙醇溶液1 0 m L ,0.1%甲基红乙醇溶液7ml , 4 % 氢氧化钠水溶液0.5ml , 混合，置阴凉处保存期为一个月( 全自动程序用) 。 

 

5 仪器设备 

5.1实验室用样品粉碎机或研钵 

5 . 2 分样筛: 孔径0.45mm ( 4 0 目）。

5 . 3 分析天平: 感量0.0001g 。

5 . 4 消煮炉或电炉 

5 . 5 滴定管:酸式，1 0 、2 5 m L , 

5 . 6 凯氏烧瓶: 2 5 0 m L , 

5 . 7 凯氏蒸馏装置:常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式。 

5 . 8 锥形瓶: 1 5 0 、2 5 0 m L , 

5 . 9 容量瓶: 1 0 0 m L , 

5.10消煮管: 2 5 0 m L .

5 . 11 定氮仪:以凯氏原理制造的各类型半自动，全自动蛋白质测定仪。

 

6 试样的选取和制备选取具有代表性的试样用四分法缩减至2 0 0 g，粉碎后全部通过4 0目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。 

 

7 分析步骤 

7.1仲裁法 

7.1.1试样的消煮

  称取试样0.5 - 1 g (含氮量5 - 8 0 m g )准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶（5.6）中，加入6.4g混合催化剂(4.2)，与试样混合均匀，再加入1 2 m L硫酸( 4 . 1 )和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶( 5 . 6 )置于电炉( 5 . 4 ) 上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力(360 - 410℃)直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。

7.1.2 氨的蒸馏(蒸馏步骤的检验见附录A) 

7.1.2.1常量蒸馏法

  将试样消煮液(7.1.1)冷却，加入6 0 - 1 0 0 m L蒸馏水，摇匀，冷却。将蒸馏装置( 5 . 7)的冷凝管末端浸入装有2 5 m L硼酸( 4.4)吸收液和2 滴混合指示剂( 4.5)的锥形瓶内。然后小心地向凯氏烧瓶(5.6)中加入5 0 m L氢氧化钠溶液(4.3)，轻轻摇动凯氏烧瓶(5.6)，使溶液混匀后再加热蒸馏，直至流出液体积为1 0 0 m L。降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏1 - 2 m i n ，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。

7.1.2.2半微量蒸馏法

  将试样消煮液(7.1.1)冷却，加入2 0 m L燕馏水，转入1 0 0 m L容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。将半微量蒸馏装置( 5 . 7 )的冷凝管末端浸人装有2 0 m L硼酸( 4 . 4 )吸收液和2滴混合指示剂(4.5)的锥形瓶( 5 . 8 )内。蒸汽发生器( 5 . 7 )的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液1 0 - 2 0 m L注入蒸馏装置( 5.7 ) 的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加1 0 m L氢氧化钠溶液( 4 . 3)，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏4 m i n 降下锥形瓶(5.8) 使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1 m i n ，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流人锥形瓶内,然后停止蒸馏。

注:7.1.2.1和7.1.2.2 蒸馏方法测定结果相近可任选一种。 

7.1.2.3 蒸馏步骤的检验

  精确称取0.2g 硫酸铵( 4.8)，代替试样，按7.1.2或7.2.2步骤进行操作，测得硫酸按含氮量为21.19士0.2%，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。

7.1.3 滴定

  用7.1.2.1或7.1.2.2法蒸馏后的吸收液立用0.1mol/L(4.6.1)或0.02mol/L. ( 4.6.2)盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。 

7 . 2推荐法 

7.2.1试样的消煮

  称取0.5~1g试样(含氮量5~80mg)准确至0.0002g ,放入消化管中，加2片消化片(仪器自备)或6.4 g混合催化剂(4.2) , 12 m l硫酸(4.1)，于420℃下在消煮炉上消化1 h 。取出放凉后加入30m l蒸馏水。 

7.2.2氨的蒸馏

  采用全自动定氮仪(5. 11)时，按仪器本身常量程序进行测定。采用半自动定氮仪(5. 11)时，将带消化液的管子插在蒸馏装置上，以2 5 m L硼酸(4.4)为吸收液，加入2滴混合指示剂( 4.5 ) , 蒸馏装置(5.7)的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消煮管中加入5 0 m l氢氧化钠溶液(4.3)进行蒸馏。蒸馏时间以吸收液体积达到100ml时为宜。降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗冷凝液末端，洗液均需流入锥形瓶内。

7.2.3滴定用0.1mol/L的标准盐酸溶液(4.6.1) 滴定吸收液，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。 

 

8 空白测定

称取蔗糖0.5 g，代替试样，按第七章进行空白测定，消耗0.1mol/L盐酸标准溶液(4.6.1)的体积不得超过0.2ml, 消耗0.02mol/L盐酸标准溶液( 4.6.2 )体积不得超过0.3ml。 

9 分析结果的表述

9 . 1计算见下式：

(V2-V1)xCx0.14x6.25

粗蛋白（%）= ——————————X 100 

                        M x V '/V

式中：V2—滴定试样时所需标准酸溶液积,mL  

        V1—滴定空白时所需标准酸溶液体积, m L  

        C —盐酸标准溶液浓度，m o l/ L ; 

      M—试样质量, g V —试样分解液总体积，m I  

           V ' —试样分解液蒸馏用体积，m L  

      0.014—每毫克当量氮的克数; 

           6.25—氮换算成蛋白质的平均系数。

9 . 2 重复性每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。当粗蛋白质含量在2 5 %以上时，允许相对偏差为1 % 当粗蛋白质含量在1 0 % - 2 5 % 之间时，允许相对偏差为2 % 当粗蛋白质含量在1 0 %以下时，允许相对偏差为3 %   

 

附加说明: 

。

本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。

本标准由国家饲料质量监督检验中心(北京)负责修订。本标准起草人马东霞。

饲料中水分和其他挥发性物质含量的测定GB/T 6435-2006 

1 范围

本标准规定了饲料中水分和其他挥发性物质含量的测定方法，本标准适用于动物饲料水分含量，但用作饲料的奶制品、动物和植物油脂、矿物质除外

2原理

根据样品性质的不同，在特定条件下对试样进行干燥所损失的质量在试样中所占的的比例。

3 仪器和材料 

4  实验室常用及以下仪器、材料

4.1分析天平：感量0.0001g 

4.2实验室用样品粉碎机或研钵。 

4.3分析筛:孔径0.45mm(40目)。 

4.4 电热式恒温烘箱:可控制温度为105±2℃。 

4.5电热鼓风干燥箱：可控制温度为103±2℃。 

4.6称样皿:玻璃或铝质,其表面积使样品展开约为0.3g/m3。 

4.7 干燥器:用氯化钙(干燥试剂)或变色硅胶作干燥剂 

4.8 砂：经酸洗