Detailedanalysis of the plasma extracellular vesicle proteome after separation from lipoproteins.
去除脂蛋白后的血浆细胞外囊泡蛋白质组学详细分析。
[Cell Mol Life Sci] IF=5.79
PMID：29441425
从血液中分离细胞外囊泡（EVs）对于了解循环细胞外囊泡的生物学作用以及将细胞外囊泡作为疾病的生物标志物发展具有重要意义。
然而，由于同时存在脂蛋白颗粒，血液是分离EVs最困难的体液之一。
该研究的目的是开发一种强有力的方法，降低血浆蛋白和脂蛋白颗粒的影响，从血液中分离和表征细胞外囊泡。
实验从健康受试者收集血浆和血清，并且通过尺寸排阻色谱（SEC）分离EV，其中大部分颗粒存在于8-12部分洗脱液中，而大部分血浆蛋白存在于11-28部分洗脱液中。囊泡标记在7-11部分洗脱液中达到峰值; 然而也发现在相同的部分也含有脂蛋白颗粒。细胞外囊泡的纯度通过将密度垫超速离心与SEC结合以进一步将脂蛋白颗粒从囊泡中去除掉，从而将脂蛋白颗粒的污染降低了近100倍。使用这种新颖的分离程序，通过质谱法在血浆EV中鉴定了总计1187种蛋白质。
该研究表明单独使用SEC不能将脂蛋白颗粒从血浆EV样品中完全去除，将SEC与密度垫超速离心结合使用显着改善了EVs与脂蛋白的分离情况，从而允许研究者对血浆EV的蛋白质组进行详细分析，这使得血液成为EV生物标记物发现的可行来源。
Fig.1
实验工作流程示意图
从空腹的健康受试者早晨采集血液，分离血浆和血清。
用几种方法从血浆和血清中分离EVs，并从脂蛋白颗粒和血浆蛋白中分离出来。
Fig.2
评价尺寸排阻色谱法分离的EVs
Fig 3
脂蛋白和EVs的尺寸和密度示意图。
Fig 4
通过密度和尺寸排阻色谱联法提取的Evs评价。
Fig 5
通过超速离心结合密度和尺寸排阻色谱法分离EVs的评价。
Fig. 6
从富集EVs和脂蛋白碎片中分离出的RNA。
参考文献：
Nasibeh Karimi, Aleksander Cvjetkovic, Su Chul Jang, Rossella Crescitelli, Mohammad Ali Hosseinpour Feizi, Rienk Nieuwland, Jan Lötvall, Cecilia Lässer. Detailed analysis of the plasma extracellular vesicle proteome after separation from lipoproteins[J]. Cellular and Molecular Life Sciences.
https://doi.org/10.1007/s00018-018-2773-4
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