蛋白质组学的研究是生命科学进入后基因组时代的特征，不仅是探索生命奥秘的必须工作，也能为人类健康事业带来巨大的利益。以蛋白质的角度研究生命现象和规律已成为研究生命科学的主要手段。
研究蛋白质的关键点在于技术的选择，今天就给大家介绍一种先进的、同时可对 8 个样本进行分析的 iTRAQ 技术。
iTRAQ 技术是由美国应用生物系统公司 2004 年开发的同重标签标记的相对和绝对定量技术。
技术优势
1. 灵敏度高：可检测出低丰度蛋白；
2. 分离能力强： 可分离出酸/碱性蛋白，小于 10KD 或大于 200KD 的蛋白、难溶性蛋白等；
3. 适用范围广：可以对任何类型的蛋白质进行鉴定，包括膜蛋白、核蛋白和胞外蛋白等。
4. 高通量：可同时对 8 个样本进行分析，特别适用于采用多种处理方式或来自多个处理时间的样本的差异蛋白分析；
5. 结果可靠：定性与定量同步进行，同时给出每一个组分的相对表达水平、分子量和丰富的结构信息；
6. 自动化程度高：液质连用，自动化操作，分析速度快，分离效果好。
实验流程
1. 收集不同组别的样本并分别提取蛋白质；
2. 蛋白质经过还原，封闭后用胰蛋白酶酶切；
3. 各组样本的肽段混合物分别用不同的 iTRAQ 试剂标记；
4. 等量混合各样本中的标记肽段；
5. MS/MS 质谱检测及分析。
技术原理
报告部分共有 8 种：质量数分别为 114～121 Da，因此 iTRAQ 最多可同时标记 8 组样品（客户可按需选择标记个数）。
肽反应部分：能与肽链 N 端及赖氨酸侧链发生共价连接，从而将报告部分和平衡部位标记到肽段上，几乎可以标记所有蛋白质。
平衡部分：质量数分别为 31～24Da，与报告部分相互配合，保证 iTRAQ 试剂标记的不同样本的同一肽段具有相同的质荷比。
信息分析
数据产出统计
蛋白质鉴定结果
蛋白质定量结果
蛋白质 GO 分析
蛋白质 COG 分析
蛋白质 Pathway 代谢通路分析
差异蛋白 GO 富集分析
差异蛋白的 Pathway 富集分析
重复性分析（仅针对有重复设计的项目）
多样品间表达模式聚类（适用于样本数 ≥3 的项目也可以根据客户的要求进行个性化定制分析）
作者：丁香通
图片来源：丁香通合作客户
题图来源：丁香通
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