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储存温度会影响外泌体的完整性?

科研实验大家谈 2018-11-08 13:14:30


外泌体是一种直径在40-110 nm之间的细胞外囊泡,其内包含RNA、蛋白质、microRNA、DNA片段等多种物质,存在于血液、唾液、尿液、脑脊液和母乳等多种体液中,在细胞间的交流中扮演重要作用。近年来,很多研究发现外泌体在抗原提呈细胞中呈递抗原程中、肿瘤细胞发生发展、神经细胞信号转导过程中都发挥着重要作用。

外泌体中含有许多细胞来源的生物分子,并且会对微环境的变化产生反应,因此,为了对外泌体含量和功能进行可重复的研究,需要研究对外泌体完整性影响最小的储存条件。


  为了研究不同储存温度对外泌体形态,蛋白质含量的影响,Rosario Maroto等人通过动态光散射(DLS)、透射电子显微镜(TEM)和电荷密度(zeta电位,ζ)及LC-MS/MS等方法研究对比了新鲜的及储存在+ 4°C和-80°C的小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)外泌体。

  研究发现储存对BALF外泌体大小和含量有显著影响。新鲜分离的BALF外泌体具有95 nm的平均直径和特征形态。而储存在+ 4℃的外泌体的直径增加了10%,再分布到多分散聚集体并减少了ζ。在-80℃下的储存的外泌体直径更是增加了25%,ζ显著降低,导致多层结构的形成。储存不仅仅改变了外泌体形态,还显著改变了其蛋白含量。在新鲜的外泌体中,研究人员鉴定出了1140个富含19个基因组本体生物过程的高信度蛋白。而在室温下储存后,只鉴定出848个蛋白质。与新鲜制备的外泌体洗涤部分相比,在+ 4℃储存的制剂的上清液部分出现224个蛋白质,这些蛋白质代表外泌体泄漏或松散结合的“外泌体外周”蛋白的解离。在-80℃储存的制剂中,上清液中出现194个蛋白质,表明不同的蛋白质组在不同的储存温度下从外泌体中泄漏出来。


结论:储存会显著影响BALF外泌体的表面特征、形态特征和蛋白质含量。为了保存外泌体蛋白质含量和代表性功能分析,目前最好的方法可能还是分离后立即分析。



参考文献: Maroto R, Zhao Y, Jamaluddin M, Popov VL, Wang H, Kalubowilage M, et al. Effects of storage temperature on airway exosome integrity for diagnostic and functional analyses[J]. J Extracell Vesicles. 2017,6(1):1359478.

(转自exosomes)