毫克级蛋白快速表达以及株系构建

2023-05-18 23:00:13

服务简介

吉锐生物的抗体表达专家在 CHO-K1 基础上开发出以短周期高表达株系 CHO-SC 为表达载体的真核表达系统。该系统通过在IOS (Integration Operating System)技术的基础上发展起来的多拷贝整合技术(Multiple Copy Integration-MCI)完成目的基因在细胞基因组中的多拷贝整合而实现重组蛋白的超高表达,同时实现稳定遗传。高效的转染和整合技术,加上特有的短周期高表达株系,可以低成本,短周期为您提供毫克级的高质量蛋白,解决传统的表达系统所面临的多种缺陷,帮助您快速获得满意的实验结果。

技术原理

1、CHO-SC株系介绍:吉锐生物通过对 CHO-K1 细胞进行改造,得到的 CHO-SC 细胞拥有更快的分裂周期和更好的分散性。


CHO-SC株系跟其他CHO类型细胞的优势所在:



2、IOS专利技术,原理示意图如下:

图1:IOS专利技术原理


3、采用独家CHO-MCI(多拷贝整合)技术,构建定点整合载体并将其电转到 CHO-SC 细胞中,使目的蛋白基因定点整合到 CHO-SC 高表达位点上,实现目的基因的高表达。

实验流程

1. 亚克隆:将客户优化好的目的基因 (吉锐生物也可以提供基因优化服务)克隆到吉锐生物的定点整合载体上;

2. 转染:采用独家的 CHO-MCI(多拷贝整合)技术,将定点整合载体电转到 CHO-SC 细胞中;

3. 稳转池验证:30ml 摇瓶小试、亲和纯化目的蛋白、SDS-PAGE、蛋白定量;

4. 扩大培养:根据 30 ml 小试的定量结果,估算获得客户要求数量的蛋白所需培养液体积,拿到足够量的蛋白;

实验案例

图2:表达eGFP蛋白Pool细胞培养上清亲和纯化后SDS-PAGE检测,条带单一明显。


图3:纯化后的目的蛋白(eGFP)肉眼观察可见明显绿色荧光,蛋白活性佳。

技术优势

解决 E.coli 表达真核蛋白时,易形成包涵体的问题;与其他表达系统比较,表达的真核蛋白结构更接近天然结构,活性更高;表达产物有正确的修饰,比如糖基化,甲基化等;解决真核生物表达,成本高昂的问题;生产周期短,可以快速达到 ug, mg 级别,用于抗原抗体的制备。

高表达蛋白单克隆细胞株构建

若您需要高表达单克隆细胞株,则需要进行阳性单克隆筛选:

对加压检测有蛋白表达的pool细胞做有限稀释,挑选单克隆细胞进行培养,6孔板培养单克隆细胞6天后收集细胞上清进行SDS-PAGE,检测单克隆细胞蛋白表达情况,下图4为表达某蛋白的单克隆细胞培养上清SDS-PAGE检测图,从图片可见41#克隆和39#表达量明显。


图4:SDS-PAGE检测不同克隆目的蛋白表达量情况





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