蛋白质可溶性表达的可靠选择——冷休克表达系统

       将37℃培养的大肠杆菌切换到低温培养时，大肠杆菌生长会暂时停止，此时，大部分的蛋白质表达会减少，而一类称为冷休克蛋白的CSPs蛋白质会被特异性诱导表达，Takara冷休克表达系统pCold™系列就是围绕这一机制而研发。同以往的大肠杆菌表达系统相比，pCold™系列可高效获得高纯度目的蛋白。

        pCold™系列采用冷休克基因之一的cspA基因作为启动子，下游插入了lac operator，可以严紧调控蛋白质表达。还有5’非编码区 (5’UTR)、翻译增强元件TEE序列、His tag序列、Factor Xa切断序列和多克隆位点。随着蛋白质的功能解析、结构解析工作的开展，这个系列制品成为蛋白质研究的重要工具。

冷休克表达系统pCold™系列的特点

(1) 背景低，可进行高效表达

    低温培养时，大肠杆菌来源蛋白表达量偏低，蛋白酶活性也低，因而容易获得未降解的完整目的蛋白，且回收率高，目的蛋白纯化更简单，也可利用同位素进行高效标记（图1）。

(2) 提高可溶性表达

   冷休克表达系统能有效解决T7系统出现的蛋白质不表达或不溶性表达问题（图2、3）。同时使用Chaperone competent cells和Chaperone plasmid可进一步提高蛋白可溶性表达。

(2) 可使用广泛的大肠杆菌作为宿主

   pCold™系列应用大肠杆菌来源的cspA启动子进行转录，因此可使用绝大部分大肠杆菌作为宿主。

冷休克表达系统的标准操作流程

冷休克表达载体制品

（一）不含可溶性标签的基本型载体

  pCold™ I~IV DNA（Code No.3361~3364）

1.表达效率高：目的蛋白最高表达量可达大肠杆菌宿主蛋白的60%

2.可溶性表达增加：很多在T7系统中不表达或者不溶性表达的蛋白质可能实现可溶性表达（同时使用Chaperone competent cells和Chaperone plasmid可进一步提高目的蛋白可溶性表达）

3.便于进行同位素标记：目的蛋白、新生蛋白高达90%，可以进行有效标记

（二）融合表达GST标签的载体

   pCold™ GST DNA（Code No.3372）

1.即使不进行表达条件优化，也可实现目的蛋白质的高溶解度表达

2.可以进行GST亲和纯化、His标签纯化，也可将标签切断

（三）融合表达ProS2标签的载体

   pCold™ ProS2 DNA（Code No.3371）

1.通过融合表达ProS2标签提高目的蛋白可溶性

2.可利用His标签纯化，也可切断可溶性标签

3.ProS2标签与目的蛋白的相互作用很弱，可有效分离目的蛋白

实验例介绍与用户反馈

冷休克系统关联制品

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