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【分析】基于恶唑酮化学正向富集策略的蛋白质C-末端肽段高灵敏检测新方法

X一MOL资讯 2020-10-11 10:17:42

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蛋白质C末端对蛋白质参与各项生命活动起着非常重要的作用,因此,发展高通量、高灵敏分析蛋白质C末端的方法,促进人们对蛋白质C末端的进一步理解具有十分重要的意义。


针对现有C末端肽段分析存在的难点,复旦大学陆豪杰教授课题组发展了一种基于恶唑酮化学的正向选择性富集、高通量分析蛋白质C-末端肽段的新方法:在恶唑酮化学的基础上,选择性地将一端连有精氨酸,另一端连有生物素基团的双功能化试剂连接到蛋白质的C末端,并利用生物素-链霉亲和素反应实现了对蛋白质C末端肽段的正向富集,大大简化了样品分析体系,克服了现有反向富集方法中非末端肽段信号干扰严重的不足;由于精氨酸的引入,大大提高了蛋白质C末端肽段在质谱检测时的离子化效率;基于恶唑酮化学的衍生化反应效率高,对几乎所有的氨基酸都具有普适性;双官能团分子的引入有效地提高了质谱鉴定C末端肽段的分子量范围,即使短至3个氨基酸的肽段都能得到很好地鉴定;通过优化数据库检索流程,将衍生上去的精氨酸和Biotin-NHNH2均设定为氨基酸写入数据库中,增加了b,y离子的信息,大大提高了C-末端肽段的质谱鉴定率。


这一研究成果发表在《Analytical Chemistry》上。


http://pubs.acs.org/doi/pdf/10.1021/acs.analchem.5b02437


原文标题:Positive Enrichment of C-Terminal Peptides Using Oxazolone Chemistry and Biotinylation



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