科技进展|Nature Protocols:高通量检测单细胞中RNA和蛋白质的新方法
2023-05-18 23:00:13
导语：美国罗格斯大学的Sanjay Tyagi及其同事开发出一种新方法，在流式细胞仪上实现了高通量的sm-FISH和免疫荧光分析，可同时定量单细胞中的mRNA和蛋白质。
关键词：流式细胞仪；高通量检测
定量单细胞中的RNA和蛋白质有助于了解组织或肿瘤内的基因表达差异。多年来，人们开发出各种各样的方法来进行精确定量。大约20年前，Robert Singer及其同事开发出单细胞荧光原位杂交（sm-FISH）方法，被证明是在细胞水平上研究RNA定位的工具。最近，这种技术又与免疫荧光结合，以便观察和定量每个细胞中的蛋白质和RNA，但在显微镜下分析大量细胞，仍然是相当费时费力的。
近日，美国罗格斯大学的Sanjay Tyagi及其同事开发出一种称为FISH-Flow的新技术可以检测每个细胞中低至10个拷贝的mRNA分子，以及细胞表面和细胞内的各种蛋白质,适用于悬浮培养和贴壁培养的细胞。
Tyagi表示：“尽管sm-FISH有着检测单分子的灵敏度，但必须对大量细胞进行成像，才能了解细胞群体的平均行为。将单细胞FISH转移到流式细胞仪，避免了高倍数成像带来的艰巨工作，可以一次分析数千个细胞。”
当然，FISH-Flow也有一些限制。例如，它不适用于不足500个核苷酸的RNA，因为每个RNA至少需要30个探针。此外，许多基因的表达水平很低，每个细胞只有几个拷贝通过FISH-Flow来检测这种低表达的RNA是很有挑战性的。必须发明无背景的原位信号放大技术才行，FISH-Flow这种技术适用于大多数RNA以及荧光探针-抗体组合。
来源：生物通
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