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样本前处理规范之血液样本

静中心医联办 2019-06-16 01:05:30


     血液样本采集完毕需要尽快进行前期处理。样本处理前的冷藏最好不超过4h以尽量降低凝血反应等生化反应的影响。不能在采集地点立刻进行前期处理的样本也应低温冷藏并尽快转移至处理中心处理。采集的全血经过分离后成为血清血浆和血沉棕黄层等血液成分进行样本储存或继续进行提取DNA蛋白质等样本制备。



1

全血


(1)采集的血液样本如不进行成分的分离直接用于全血的储存也需要稍作前期处理。抗凝的血液应被快速地冷冻上。如果需要完整的血细胞则需要使用二甲基亚矾(DMS0)以确保在冷冻时细胞是存活的。

(2)血液按要求分装到统一规格的无菌冻存管中加入DMS0混合均匀后将冻存管放入冷冻冰箱中。在至少4h才能转移到-86℃或更低温条件下储存。

↑各种采血管



2

血浆、血沉棕黄层和红细胞


用途:

      用EDTA管和ACD管米集的血液经离心后可以分为三层上层的血浆中层的血沉棕黄层和下层的红细胞。血浆可以用于生物鉴定游离DNA提取蛋白质组学分析和生物标志物发现等研究。血沉棕黄层是一层很薄的灰白色的白细胞和血小板层可以用于DNA的提取和细胞系的产生。


处理方法:

(1)4℃下离心真空采血管(大约5mL)使血浆从血细胞中分离。

(2)70%的乙醇对采血管顶端和管盖进行清理消毒后取出上层血浆(3mL)分至5~6个标记好的冻存管中每管500µL(每管分裝的体积可视具体情况而定)

(3)取出中层的血沉棕黄层(为了完整地取出中层在上层血浆分离时可适当留取部分样本如棕黄层以上4mm处即停止取样也可将棕黄层以下4mm内的红细胞一起取出共约1mL)平均分裝。

(4)将下层红细胞转移至标记好的冻存管中。

(5)将上述冻存管放入液氮中快速冷冻。对于白细胞层最好使用程序降温法进行冷冻。

(6)冷冻好的样本储存在-86℃或液氮环境中。



3

血清、血凝块


      采集到添抗凝剂的采血管中的血液室温下会在30min后自动分成两相固相含有纤维蛋白和细胞液相则含有血清。

(1)室温下离心真空采血管;

(2)将上清液转移至5个标记好的冻存管中;

(3)将下层血凝块用无菌光滑玻璃棒轻轻混匀然后用药匙小心地分裝至2个标记好的冻存管中;

(4)将冻存管放入液氮杜瓦瓶或干冰中快速冷冻;

(5)储存在-86℃冰箱或液氮环境中。



4

滤纸血斑


      将采集的血液处理成血斑时需要用到滤纸。使用EDTA/ACD管采集的血液来制造血斑。取滤纸时一定要戴手套且只能捏拿滤纸的最上角标记好。不要让滤纸接触到任何不干净的表面。

(1)在开始前反转真空采血管使得里面的抗凝血充分混合;

(2)打开管盖前先用70%的乙醇擦拭采血管的顶部;

(3)使用微量移液管吸取一定量的血液滴到滤纸圈中制得滤纸血斑;

(4)将滤纸放置在二级生物安全柜内自动晾干;

(5)将滤纸放在含干燥剂和湿度检测条的密封袋如纸质信封内-20℃储存。



*注意事项*

(1)制备血浆时应尽快离心血液。

(2)制备血清时血液应该在采集后1h内处理好。超过此时间细胞活性会迅速下降导致细胞结构脆弱蛋白质和核酸降解。

(3)用于蛋白质组学研究的血液标本应在室温下尽快处理好因为低温会激活血小板并释放肽段到体外样本中。


本文内容选自《生物样本库建设与实践》



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