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如何用TRIzol分离RNA、DNA和蛋白质?

广州鼎国生物 2020-06-04 16:29:41


一、trizol简介

RNA提取试剂/Trigol是鼎国开发的针对次生物质含量较少的植物组织和动物组织RNA提取产品,具有更强的裂解能力,并且能有效去除蛋白污染,能够很好的保持RNA分子的完整性。

 
二、trizol使用方法

TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。(1)TRIzol试剂有多组分分离作用,与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比,最大特点是可同时分离一个样品的RNA/DNA/蛋白质。(2)TRIzol使样品匀浆化,细胞裂解,溶解细胞内含物,同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。在加入氯仿离心后,溶液分为水相和有机相,RNA在水相中。取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA;用乙醇沉淀中间层可回收DNA;用异丙醇沉淀有机相可回收蛋白质。


三、trizol使用范围

(1)TRIzol试剂可用于小量样品(50-100mg组织、5×106细胞)也适用于大量样品(≥1g组织、>107细胞)。

(2)对人,动物,植物组织,细菌均适用,可同时处理大量不同样品,整个提取过程在一小时内即可完成。

(3)分离的总RNA无蛋白质和DNA污染,可用于Northern Blot,dot blot,ployA筛选,体外翻译,RNase保护分析和分子克隆。

(4)在用于RT-PCR时如果两条引物存在于一个单一外显子内,建议用无RNase的DNaseⅠ处理RNA样品,避免出现假阳性。

(5)共纯化的DNA可用作标准,比较不同样品RNA的得率,也可用于PCR和酶切。蛋白质可用于Western Blotting。


四、预防RNase污染注意事项

1. 经常更换新手套,皮肤上常带有的细菌,霉菌可能成为RNase的来源。
2. 使用灭过菌的RNA专用塑料制品避免交叉污染。
3. RNA在TRIzol试剂中时不会被RNase污染,但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时,塑料制品可在0.5M NaOH中浸泡10分钟,然后用水彻底清洗,高压灭菌,即可去除RNase。
4. 配制溶液应使用无RNase的水(将水加入处理过不含RNase的玻璃瓶中,加入DEPC至终浓度0.01℅v/v,放置过夜,高压灭菌。注:DEPC有致癌之嫌,需小心操作。)


五、注意事项

1:请勿直接接触皮肤或吞咽,以免灼伤。如接触皮肤应立即用洗涤剂和大量水冲洗。忌用乙醇擦洗,乙醇会加重灼伤程度。

2:4℃避光保存。