如何用TRIzol分离RNA、DNA和蛋白质?

2023-05-18 23:00:13


一、trizol简介

RNA提取试剂/Trigol是鼎国开发的针对次生物质含量较少的植物组织和动物组织RNA提取产品，具有更强的裂解能力，并且能有效去除蛋白污染，能够很好的保持RNA分子的完整性。

 
二、trizol使用方法

TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。（1）TRIzol试剂有多组分分离作用，与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚／SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点是可同时分离一个样品的RNA/DNA/蛋白质。（2）TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA；用乙醇沉淀中间层可回收DNA；用异丙醇沉淀有机相可回收蛋白质。


三、trizol使用范围

（1）TRIzol试剂可用于小量样品（50-100mg组织、5×106细胞）也适用于大量样品（≥1g组织、>107细胞）。

（2）对人，动物，植物组织，细菌均适用，可同时处理大量不同样品，整个提取过程在一小时内即可完成。

（3）分离的总RNA无蛋白质和DNA污染，可用于Northern Blot，dot blot，ployA筛选，体外翻译，RNase保护分析和分子克隆。

（4）在用于RT-PCR时如果两条引物存在于一个单一外显子内，建议用无RNase的DNaseⅠ处理RNA样品，避免出现假阳性。

（5）共纯化的DNA可用作标准，比较不同样品RNA的得率，也可用于PCR和酶切。蛋白质可用于Western Blotting。


四、预防RNase污染注意事项

1． 经常更换新手套，皮肤上常带有的细菌，霉菌可能成为RNase的来源。
2． 使用灭过菌的RNA专用塑料制品避免交叉污染。
3． RNA在TRIzol试剂中时不会被RNase污染，但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时，塑料制品可在0.5M NaOH中浸泡10分钟，然后用水彻底清洗，高压灭菌，即可去除RNase。
4． 配制溶液应使用无RNase的水（将水加入处理过不含RNase的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.01℅v/v,放置过夜,高压灭菌。注：DEPC有致癌之嫌，需小心操作。）


五、注意事项

1：请勿直接接触皮肤或吞咽，以免灼伤。如接触皮肤应立即用洗涤剂和大量水冲洗。忌用乙醇擦洗，乙醇会加重灼伤程度。

2：4℃避光保存。

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