蛋白组学样品准备指南

类型1

常规动物组织（心、肝、脾、肺、肾、肠、脑、肌肉等）

最低送样量

100mg

预处理及保存

• PBS 洗涤去除残留血液和污染物，迅速剥去脂肪和筋皮等结缔组织，冲洗干净

• 用组织剪或手术刀将组织分离成 1cm3 左右的小块

• 液氮速冻，保存于-80℃

类型2

软骨组织

最低送样量

100mg

预处理及保存

• PBS 洗涤

• 用手术刀将软骨切成 1cm³ 左右的小块，

• 液氮速冻，保存于-80

类型3

软体动物（吸虫等）

最低送样量

100mg

预处理及保存

• PBS 洗涤去除来自宿主的污染

• 液氮速冻，保存于-80℃

类型1

大本植物茎、叶、花等

最低送样量

200mg

预处理及保存

• PBS 清洗，吸水纸吸去表面液体

• 液氮速冻，保存于-80℃

类型2

大本植物茎、叶、花等

大本植物树根、树皮、树枝等

最低送样量

200mg

预处理及保存

• PBS 清洗，吸水纸吸去表面液体

• 液氮速冻，保存于-80℃

类型3

种子

最低送样量

500mg

预处理及保存

• PBS 清洗，吸水纸吸去表面液体

• 液氮速冻，保存于-80℃

类型4

果肉

最低送样量

2g

预处理及保存

• 去皮切成 1cm³ 左右小块

• 液氮速冻，保存于-80℃

类型5

草本植物、藻类、蕨类等

最低送样量

200mg

预处理及保存

• PBS 清洗，吸水纸吸去表面液体

• 液氮速冻，保存于-80℃

类型6

花粉

最低送样量

200mg

预处理及保存

• 植物开花期收集花粉，解剖显微镜下检查花粉

• 用解剖针去除花药碎片等杂质，转入 EP 管中，光学显微镜下检查花粉的形态和纯度

• 保存于-80℃

类型1

细菌类

最低送样量

200mg

预处理及保存

• 3000rpm-5000rpm  离心 5-15min，去上清

• PBS 洗涤沉淀三次

• 液氮速冻，保存于-80℃

类型2

真菌类（菌菇）

最低送样量

2g

预处理及保存

• PBS 清洗，吸水纸吸去表面液体

• 液氮速冻，保存于-80℃

类型

贴壁培养细胞

最低送样量

10⁶个

预处理及保存

• 弃掉培养液，并将培养皿倒置于吸水纸上吸干培养液

• 加入 4℃预冷的 PBS，平放轻轻摇动 1 分钟洗涤细胞，然后弃去 PBS，重复以上操作两次以洗去培养液

• 将培养皿置于冰上，向培养皿内加入 4℃预冷的 PBS，用干净的细胞刮棒将细胞刮于培养皿的一侧（动作要快），冰上斜置培养皿，使得缓冲液流向一侧，用移液管吸取溶解产物至预冷的离心管内，离心去上清

• 液氮速冻，保存于-80℃

类型1

血清

最低送样量

100ul

预处理及保存

• 收集好的全血室温静置两小时

• 3000rpm 离心 10min，取上清

• 液氮速冻，保存于-80℃

类型2

血浆

最低送样量

100ul

预处理及保存

• 收集好的全血加入抗凝剂，室温静止 30 分钟

• 1300rpm-2000rpm 离心 10min，取上清

• 液氮速冻，保存于-80℃

类型3

尿液

最低送样量

10ml

预处理及保存

• 5000rpm 4°C 离心 30-60min，取上清

• 保存于-80℃

类型4

唾液

最低送样量

1ml

预处理及保存

• 禁食两小时以上，上午取样

• 1000rpm-2000rpm 离心 5min，（或使用 0.22μm 滤膜过滤），取上清

• 保存于-80℃

类型5

脑脊液、关节液、淋巴液、附睾腔液等

最低送样量

100ul

预处理及保存

• 1000rpm-2000rpm 离心 5min，（或使用 0.22μm 滤膜过滤），取上清

• 保存于-80℃

类型

发酵液

最低送样量

100ml

预处理及保存

• 10000rpm-20000rpm 离心 30-60min，（或使用 0.22μm 滤膜过滤），取上清

• 保存于-80℃

类型

血液或者细胞发酵液中

最低送样量

200ug  以上

预处理及保存

• 血液 5mL,细胞培养基不等

• 用超速离心或其他方法提取外泌体， 用电镜观察外泌体形态（推荐）

• 用蛋白裂解液重悬外泌体测浓度， 每个样品至少 100ug， 200ug 以上最佳（iTRAQ/TMT 200ug 及以上， Label-free 100ug）测外泌体蛋白纯度， wb，推荐做，为了保证样品质量

• 将蛋白冻干后的粉末或蛋白溶液， 用干冰寄送

类型

2D  点

最低送样量

肉眼可见

预处理及保存

• 用移液枪头将 2D 点挖下来

• 加入已装有超纯水的 EP 管中，做好标记

• 常温或冰袋寄送

类型

2D  点

最低送样量

SDS-PAGE  条带

预处理及保存

• 将需要鉴定的 SDS-PAGE 条带切下，装进 EP 管

• 常温或冰袋寄送，颜色非常浅的条带可取多个重复样本放一起

类型1

蛋白干粉

最低送样量

100ug

预处理及保存

• 冻干的蛋白粉末装入 EP 管，常温寄送

类型2

蛋白溶液

最低送样量

1ug/ul*20ul

预处理及保存

• 提好的蛋白溶液保存于-80℃，干冰寄送