，研究了泉古菌中核染色质蛋白Cren7与DNA的相互作用结构基础。。
Cren7是一个新发现的核染色质蛋白，在泉古菌中高度保守。Cren7蛋白对双链DNA的亲和力高于单链DNA，在体外约束DNA负超螺旋，在体内与基因组DNA关联。作者解析了Cren7蛋白与DNA的复合体晶体结构，通过突变加SPR相互作用分析，检验了Cren7蛋白上与DNA互作相关的氨基酸残基。
SPR实验使用Biacore 3000仪器在25摄氏度完成。Running buffer为50mM Tris-Cl, pH 7.6, 100mM NaCl, 0.005% (v/v) Tween 20。在SA传感芯片上稳定捕获生物素标记的互补寡核苷酸链91-97RU。一个空白通道用作参比，来效正仪器误差和容积效应的影响。野生型和突变型Cren7蛋白根据不同蛋白-DNA结合强度调整浓度梯度范围进行进样，流速30 μL/min，同时流经空白通道和DNA通道，进样2分钟。解离2-4分钟后，使用0.01% SDS进样30秒，洗去蛋白做芯片再生，进样buffer 60秒使基线稳定。每个浓度都做了一次重复实验。平衡和动力学常数使用1:1 Langmuir结合模型（BIA evaluation 4.1 software）Global fits计算得出。
图一
最终使用SPR测定了Cren7的10个单点突变（替换为丙氨酸）突变体与30bp 双链DNA片断的结合。所有的突变体对于DNA的结合亲和力都有所降低。28位亮氨酸突变为丙氨酸后，导致了最大程度（54倍）的亲和力降低，对于结构分析中此残基的重要性提供了有力的证据。Trp26，Arg51和Lys53对于DNA结合也同样重要，突变后亲和力分别降低了30，23，24倍。根据蛋白-DNA复合物的结合和解离速率，这些突变体可以分为三类。K24A和R33A属于第一类，结合和解离速率均有所提高，亲和力稍稍降低。可能由于互作表面的电势变化促进了DNA结合但使蛋白-DNA复合体稳定性下降。第二类包括P30A，K31A，V36A和Y49A，解离速率显著提高，结合速率稍稍提高。第三类包括W26A，L28A，R51A和K53A，与DNA的亲和力最低，由于解离速率的显著提高而导致。这4个残基对于稳定蛋白-DNA复合物起了最大的作用。
图二
图三
参考文献
Zhang,Z.F., Li,Y.G., Jiang,G.T.,and Li,H. (2010) Structural insights into the interaction of the crenarchaeal chromatin protein Cren7 with DNA. Molecular Microbiology 76(3), 749–759
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