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【百科】细胞外泌体的分离分析方法可鉴定出1187种蛋白质

华粤行细胞 2020-11-17 11:04:55

细胞外泌体的分离分析方法可鉴定出1187种蛋白质

从血液中分离细胞外泌体对于了解循环细胞外泌体的生物学作用以及将细胞外泌体作为疾病的生物标志物具有重要意义。然而,由于血液中同时存在大量脂蛋白颗粒,因此血液成为了分离外泌体最困难的体液之一。大量脂蛋白的存在会影响观测结果的准确性,越来越多的研究表明以往常用的血液细胞外泌体分离方法无法排除脂蛋白颗粒污染。

近日,来自瑞典哥德堡大学的研究人员采用凝胶排阻层析和密度垫超速离心结合的方法来分离血液中细胞外泌体,可将脂蛋白颗粒的污染降低约100倍。该研究从健康受试者中收集血浆和血清,通过尺寸排阻色谱(size exclusion chromatography,SEC)分离外泌体,其中大部分颗粒存在于第二梯度的部分洗脱液中,而大部分血浆蛋白则存在于第一梯度的部分洗脱液中。外泌体标记在第三梯度的部分洗脱液中达到峰值。但这个方法的局限在于相同的部分洗脱液中也含有脂蛋白颗粒。获得的细胞外泌体通过结合密度垫超速离心法与SEC法以进一步将脂蛋白颗粒从外泌体中去除掉,提高产物纯度,最终将脂蛋白颗粒的污染降低了近100倍。经过这种创新的分离程序,研究人员利用质谱法成功在血浆外泌体中鉴定出1187种蛋白质

该研究表明单独使用SEC不能将脂蛋白颗粒从血浆外泌体样品中完全去除,将SEC与密度垫超速离心结合能显著改善血液外泌体分离纯度,从而允许研究人员对血浆外泌体的蛋白质组进行详细分析,也使得血液成为外泌体生物标记物发现的可行来源。

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