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生物、药物分析中的样品前处理方法汇总

药物分析之家 2020-01-13 14:06:23


为什么要进行样品前处理

1、富集浓缩被测痕量组分(ppm,ppb, ppt 级)的作用,提高方法的灵敏度,

降低最小检测限。

2、消除基体对测定的干扰,提高方法的选择性

3、使被测组分从复杂的样品中分离出来,制成便于测定的溶液形式

4、通过衍生化的前处理方法,可以使一些在正常检测器上没有响应或响应值较

低的化合物转化为具有很高效应值的化合物。

5、样品经前处理后就变得容易保存和运输

6、可以除去对仪器或分析系统有害的物质,如强酸或强碱性物质,如生物大分

子等,延长仪器使用寿命,使分析测定能长期保持在稳定、可靠的状态下进行。

有哪些要求

1、样品是否要预处理,如何进行预处理,采样何种方法,应根据样品的性状、

检验的要求和所用分析仪器的性能第方面加以考虑。

2、应尽量不用或少使用预处理,以便减少操作步骤,加快分析速度,也可减少

预处理过程中带来的不利影响,如引入污染、待测物损失等。

3、分解法处理样品时,分解必须完全,不能造成被测组分的损失,待测组分的

回收率应足够高。

4、样品不能被污染,不能引入待测组分和干扰测定的物质。

5、试剂的消耗应尽可能少,方法简便易行,速度快,对环境和人员污染少。


生物样品分析前处理

生物样品的前处理涉及很多方面,但主要应考虑生物样品的种类,被测定药物的性质和测定方法三个方面的问题。

1.样品的分离、纯化技术应该依据生物样品的类型。例如,血浆或血清需除蛋白,使药物从蛋白结合物中释出;唾液样品则主要采用离心沉淀除去粘蛋白;尿液样品常采用酸或酶水解使药物从缀合物中释出,当原型药物排泄在尿中时,可简单地用水稀释一定倍数后进行测定。

2.样品于测定前是否需要纯化以及纯化到什么程度均与其后采用的测定方法的不同而不同。一般说来,放射免疫测定法由于具有较高的灵敏度和选择性,因此当初步除去主要干扰物质之后即可直接测定微量样品;而对灵敏度和专属性较差的紫外分光光度法,分离要求就要相应高一些;至于常用的高效液相色谱法,为防止蛋白质等杂质沉积在色谱柱上,上柱前需对生物样品进行去蛋白,有时对被测组分进行提取、制备衍生物等前处理。

药物分析中样品前处理

根据被测定药物的结构、理化及药理性质、存在形式、浓度范围等,采取相应的前处理方法。药物在样品中的浓度相差很大,浓度大的样品,对前处理要求可稍低;浓度越低则样品前处理要求越高。在测定药物及其代谢物时,样品的前处理是十分重要的。除了少数情况,将体液经简单处理后进行直接测定外,一般要在测定之前进行样品的前处理,即进行分离、纯化、浓集,必要时还需对待测组分进行化学衍生化,从而为测定创造良好的条件。

1.GC中化学衍生化法:药物的化学衍生化前处理对GC十分必要,衍生化可使药物分子中的极性基团,如羟基、氨基、羧基等变成无极性的、易于挥发的药物,从而使GC的温度不必很高即可适合GC的分析要求。主要的衍生化反应有烷基化、酰化、硅烷化等。其中已硅烷化用得最广泛。 异构体的分离也是十分重要的。分离光学异构体的方法之一,就是采用不对称试剂,使其生成非对映异构体衍生物,然后用GC法或HPLC法进行分析测定。

2.HPLC中化学衍生化法:当采用HPLC法时,其衍生化目的是为了提高药物的检测灵敏度。一些在紫外、可见光区没有吸收或者摩尔吸收系数小的药物,可以使其与衍生成对可见-紫外检测器、荧光检测器及电化学检测器等具有高灵敏度的衍生物。

小结

1.近年来发展起来的上述样品前处理方法,应用各有其特点,其中应用最为普遍成熟的是固相萃取(SPE);

2.基体分散固相萃取(MSPD)对样品的处理最为有效;

3.超临界流体萃取(SFE)速度快、效率高、几乎不消耗溶剂,但装置价格昂贵,不易推广普及。液相微萃取技术和分子印迹技术 (MIT)具有广阔的应用前景,但国内在这方面起步较晚,相关研究较少;微波辅助萃取(MAE)具有快速、高效节能、环境友好等特点,但目前对其机理的研究还不够;

4.加速溶剂技术(ASE)的提取一次只能提取一个样本,用于批量检测需要较长的时间;膜分离样品前处理技术具有选择性高、溶剂用量少、准确度和精密度均较高等特点,其不足是对萃取物质有较高要求,需要优化很多实验条件,并且其长期稳定性差;

5.免疫亲和色谱(IAC)是目前净化和富集效能最强的样品处理技术,但尚处探索阶段,仍限于常规技术净化困难的重要残留组分样品处理过程;


6.吹扫捕集技术(SCD)对环境不造成污染,具有取样量少、富集效率高、受基体干扰小及容易实现在线检测等优点,但其除水技术尚存在较大缺陷;

7.超声波辅助萃取(UAE)具有快速、价廉、提取率高的优点,但这种技术目前还多是手工操作,主要用在小型实验室,要用于大规模的工业生产尚存在一定的困难。