《微生物篇》-病毒基本能特征及检测

一.病毒基本特性

病毒是最小的微生物，必须用电子显微镜放大几万至几十万倍后方可观察。其结构简单，表现为完整的细胞结构，仅有一种核酸DNA或RNA作为遗传物质，必须在活细胞内方可显示其生命活性。

（一）.病毒的结构

病毒一般以病毒颗粒或病毒子的形式存在，具有一定的形态、结构及传染性，测量单位为纳米（nm），病毒的增殖方式是复制，最大的病毒为痘病毒，最小的病毒为圆环病毒。

1.病毒的基本结构

（1）.核衣壳

完整的病毒颗粒主要由核酸和蛋白质组成。由核酸组成的芯髓被衣壳包裹，衣壳与芯髓在一起组成核衣壳。衣壳的成分是蛋白质，其功能是保护病毒的核酸免受环境中核酸酶或其他影响因素的破坏，并能介导病毒核酸进入宿主细胞。衣壳蛋白具有抗原性，是病毒颗粒的主要抗原成分。

（2）.囊膜

有些病毒在核衣壳外面尚有囊膜。有的囊膜表面有突起，称为纤突或膜粒。

2.病毒的化学组成

（1）.核酸

病毒的核酸分两大类，DNA或RNA，二者不同时存在。病毒的核酸是决定病毒的感染性、复制特性、遗传特性的物质基础。部分动物病毒去除其囊膜和衣壳，裸露的DNA或RNA也能感染细胞，这样的核酸称为感染性核酸。

（2）.蛋白质

蛋白质是病毒的主要组成成分，具有病毒的特异性，分为结构蛋白和非结构蛋白。

（3）.脂质与糖

脂质主要存在于囊膜，糖类是某些病毒纤突的成分，如流感病毒的血凝素、神经氨酸酶等，与病毒吸附细胞受体有关。

（二）.病毒的增殖

1.实验动物培养法：可用于病毒致病性的测定、疫苗效力试验、疫苗生产、抗血清制造及病毒性传染病的诊断等。尽量采用SPF动物或无菌动物。

2.鸡胚培养法：卵黄囊接种常用5日龄鸡胚，羊膜腔和尿囊接种10日龄鸡胚，绒毛尿囊膜接种用9~11日龄鸡胚。

用鸡胚增殖禽流感病毒的最适接种部位是尿囊腔。

3.细胞培养法：用于多种病毒的分离、增殖、病毒抗原及疫苗的制备、中和试验、病毒空斑测定及克隆纯化等。

4.细胞培养的类型：原代细胞、二倍体细胞株、传代细胞系。

5.细胞培养的方法：静置培养、旋转培养、悬浮培养、微载体培养技术等。

6.细胞病变（CPE）：病毒感染导致的细胞损伤。通常CPE作为指标，计算病毒的半数细胞感染量（TCID50）来判定病毒的毒力。

7.包含体：狂犬病毒产生Negri氏体，疱疹病毒产生“猫头鹰眼”等。

8.空斑（蚀斑）:空斑是细胞病变的一种特殊表现形式，借助空斑技术不仅可纯化病毒，还可对病毒定量。通过PFU（空斑形成单位）的计数及PFU减数试验，可滴定血清的效价，测定干扰素的活性等。

（三）.病毒的感染

1.急性感染

2.持续性感染：潜伏感染、慢性感染、慢发病毒感染（绵羊痒病的阮病毒）、迟发性临床症状的急性感染。

二.病毒的检测

1.病料的采集与准备：急性期采集病料、釆集新鲜病料、病料低温保藏、抗生素处理病料等。

2.病毒的分离和鉴定

（1）.病毒的分离与培养：细胞培养、鸡胚和实验动物，其中细胞培养最常用。

（2）.病毒的鉴定：可用电子显微镜观察病毒的形态和大小；常用得血清学试验有血清中和试验、血凝抑制试验、免疫荧光抗体技术等，还可采用免疫沉淀技术和免疫转印技术分析病毒的结构蛋白成分；可采用PCR技术扩增病毒的特定基因等。

3.病毒感染单位的测定

（1）.空斑试验：一种可靠的病毒滴度测定方法，用于病毒克隆纯化。

（2）.终点稀释法：用于测定几乎所有种类的病毒滴度，包括某些不能形成空斑的病毒，并可用以确定病毒对动物的毒力或毒价。

4.病毒感染的血清学诊断方法

（1）.病毒中和试验：检测病毒和新分离病毒毒株鉴定以及检测病毒感染动物血清中的抗体，用于病毒血清型鉴定。

（2）.血凝抑制试验：具有血凝活性病毒的抗体可阻断病毒与红细胞的结合，可以检测和鉴定具有血凝特性的病毒，如流感病毒。

（3）.免疫组化技术：免疫荧光抗体技术和免疫酶染色技术，适用于检测病毒蛋白。

（4）.免疫转印技术：基于抗体与固定在滤膜上的病毒蛋白质的相互作用，可用于病毒蛋白质的分析。

（5）.ELISA：用于样本中病毒的检测和动物血清中病毒特异性抗体的检测。

5.病毒感染的分子诊断

（1）.PCR：用于检测病毒核酸和病毒感染诊断的分子生物学技术。利用寡核酸引物和DNA聚合酶，以提取的DNA样本为模板，经变性、退火、延伸等基本步骤，经多次循环，最后获得所扩增的目的基因片段，经凝胶电泳可检测目的片段的大小。

（2）.核酸杂交：DNA杂交和RNA杂交，前者用于检测病毒的DNA，后者用于检测病毒的RNA。

（3）.DNA芯片：可用于大批量样本的检测和不同病毒病的鉴别诊断。

小试牛刀

Wonderful world

1．个体体积最小的微生物是（ ）

A.病毒    B.细菌   C.支原体

D.衣原体  E.立克次体

2．最易破坏囊膜病毒感染活性的因素是（ ）

A.抗生素  B.干扰素  C.脂溶剂

D.紫外线  E.缓冲液

3．裸露病毒保护核酸免受环境中核酸酶破坏的结构是（ ）

A.膜粒    B.纤突    C.芯髓

D.衣壳    E.囊膜

4．用鸡胚增殖禽流感病毒的最适接种部位是（ ）

A.胚脑   B.羊膜腔   C.尿囊腔

D.卵黄囊 E.绒毛尿囊膜

5．用于病毒克隆纯化的方法是（ ）

A.空斑试验       B.血凝试验     

C.血凝抑制试验   D.脂溶剂敏感试验

E.胰蛋白酶敏感试验

6．病毒的增殖方式是（ ）

A.复制     B.芽殖     C.二分裂

D.减数分裂 E.孢子增殖

7．可用于纯化病毒的试验是（ ）

A.空斑试验   B.凝集试验

C.耐酸性试验 D.免疫转印试验

E.血凝抑制试验

8．决定病毒遗传特性的物质（ ）

A.核酸 B.蛋白质 C.类脂

D.糖类 E.磷酸

9．与病毒囊膜特性或功能无关的是（ ）

A.保护病毒核酸 B.介导病毒吸附易感细胞

C.对脂溶剂敏感 D.抗原性

E.为病毒复制提供遗传信息

10．必须用活细胞才能培养的微生物是（ ）

A.霉菌   B.放线菌  C.病毒

D.支原体 E.酵母菌

11．可用于病毒血清型鉴定的方法是（ ）

A.中和试验   B.耐酸性试验

C.耐酸性试验 D.敏感性试验

E.核酸酶敏感性试验

12．病毒的形态学鉴定方法是（ ）

A. PCR          B.中和试验

C.耐酸性试验    D.电子显微镜观察

E.光学显微镜观察

13．用于分离病毒，采集病料不宜的做法是（ ）

A.急性期采集病料 B.康复期采集病料

C.病料低温保藏   D.釆集新鲜病料

E.抗生素处理病料

14．病原分离鉴定常用的细胞是（ ）

A.PK-15 细胞       B.肺泡巨噬细胞

C.Marc-145 细胞    D.Veto 细胞

E.BHK-21 细胞

15．用于空斑试验进行病毒定量时应选用（ ）

A.鸡胚     B.细胞

C.实验动物 D.宿主动物

E.合成培养基

16.以下几种病毒中体积最大的是（ ）

A.口蹄疫病毒  B.猪圆环病毒

C.山羊痘病毒  D.伪狂犬病病毒

E.鸭肝炎病毒

17.用鸡胚培养病毒时，常用的接种部位不包括（ ）

A.绒毛尿囊膜   B.羊膜腔  C.尿囊

D.卵黄囊       E.气室

18.适用于检测病毒蛋白的方法是（  ）

A.核酸杂交         B.PCR技术

C.免疫转印技术     D.鸡胚接种

E.空斑试验

19. PCR检测病毒,检测的靶标是（  ）

A.蛋白     B.核酸    C.磷脂             

D.胆固醇   E.糖

20. 感染细胞后可产生的“猫头鹰眼”的病毒是（  ）

A．痘病毒  B．狂犬病毒   C．疱疹病毒

D．腺病毒  E．呼肠孤病毒

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参考答案：

1―5 A、C、D、C、A
6―10 A、A、A、E、C
11―15 A、D、B、A、B
16―20 C、E、C、B、C 

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