今天教大家一个超快速外泌体提取方法,文末有福利哦。
实验猿 A
外泌体是个啥?麻烦给我解释解释。
外泌体(Exosome)是活细胞分泌到胞外的囊泡样小体,含有多种蛋白和核酸分子(DNA、RNA、miRNA 等),参与体内细胞间通讯,细胞迁移和细胞生长等过程,对于体内细胞间物质和信号转导中有重要作用。
实验猿 A
那外泌体有啥用?
由于外泌体里的蛋白和核酸分子被囊膜包裹而被保护,稳定性高,不易降解,成为潜在的可用于许多疾病特别是肿瘤的非常理想的新型生物标记物,对于癌症的早期诊断、用药监控、预后判断有重要意义。
实验猿 A
看来我的研究很需要,但是提取过程太麻烦啦!
目前传统提取外泌体的方法主要是通过超速离心的原理实现外泌体的分离与纯化,设备成本巨大,操作程序繁琐复杂,耗时长达近 20 小时,对于操作者的技术要求很高,难以实现医学科研、临床检测上对外泌体领域应用开发的需求。
因此需要快速有效的分离提取方法以适应科研、临床上对外泌体日益深入研究的需求。
快速完成外泌体提取的方法
血液外泌体提取试剂盒根据血液外泌体表面蛋白的生物学特性,能快速地从血液中分离沉降出高纯度的外泌体。
提取过程无需超速离心,只消耗少量样品,分离出来的外泌体不仅特异性好,稳定性强,还有效地保持了其完整的生物结构和良好的生物活性,既可用于进一步的相关蛋白和核酸分析,也进行外泌体载体的细胞生物学验证分析。
话不多说,下面以知维生物的血液外泌体提取试剂盒为例,来看看具体怎么操作吧。
样本要求
1、准备新鲜或冻存的血液上清液置于冰上。如果样品是冻存的,放置于 25~37 ℃ 水浴锅直至血液完全溶解后,置于冰上。
2、小心将血液上清液,过 0.45 um 滤膜,收集过滤液。
操作步骤
1、0.5 ml 的样本 56℃ 水浴后离心取上清,
2、加入知维生物的提取液 1 和提取液 2 各 0.05 ml,冰上孵育 2 小时后离心与洗涤。
3、用 30 ul 的知维生物提取液 3,溶解外泌体沉淀, -80 ℃ 保存。
注意事项
1、方法主要适用于从血液中分离外泌体。其他样本来源的外泌体提取方法和试剂请联系知维生物。
2、对于从大体积的血液样品中(>5 ml)分离外泌体,建议按照 1 ml/份进行相应的分装,以确保充分的外泌体提取效率。
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上文中提到,可以快速完成提取操作的血液外泌体提取试剂盒正在免费试用中。
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作者:知维
图片来源:知维
题图来源:shutterstock.com 正版图库
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