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SUNS 丨人脐带间充质干细胞分化胰岛样细胞过程中胰岛素和巢蛋白的表达

舜喜再生医学 2020-03-25 16:26:16

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导读

实验目的

观察人脐带间充质干细胞向胰岛素样细胞分化过程中胰岛素与巢蛋白表达的变化。

【实验方法】


采用UltraCULTURE培养基在体外培养人脐带间充质干细胞,取培养的第3代细胞,按照两阶段诱导方案将其定向诱导分化为胰岛样细胞,第1阶段:在UltraCULTURE培养基中加入4 nmol/L活化素A,25μg/L表皮生长因子,100μg/Lβ-神经生长因子,10 mmol/L尼克酰胺,诱导培养至14 d。第2阶段:在UltraCULTURE培养基中加入1%胰岛素-转铁蛋白-硒,10 mmol/L尼克酰胺,10μg/L碱性成纤维细胞生长因子,继续诱导培养14 d。在诱导分化过程中,采用流式细胞技术检测分化细胞巢蛋白及胰岛素的表达,双硫腙染色鉴定胰岛样细胞团中锌离子的表达。


【实验结果与结论】


(1)诱导分化为胰岛样细胞过程中胰岛素水平逐渐增高,至28 d达到较高水平,未诱导组胰岛素表达呈阴性;


(2)诱导分化第14天,巢蛋白表达水平达到最大,随着诱导时间延长表达水平逐渐下降;


(3)脐带间充质干细胞诱导28 d形成胰岛样细胞团,双硫腙染色阳性;


(4)实验将脐带间充质干细胞成功诱导分化为胰岛样细胞,并且随着定向分化细胞的变化,细胞胰岛素与巢蛋白表达水平也出现相应的变化。 

舜喜再生医学

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