1、将新表位负载到患者自体的DC细胞中,然后应用成熟的DC刺激相应的PNA-T亚群特异性增殖。该策略的优点是相对成熟,但由于涉及DC的抗原负载、DC内的抗原加工、DC对T细胞的提呈等一系列过程,各个环节的技术障碍均会影响相应T细胞的富集效率;且DC细胞扩增不易,导致该流程耗费时间较长。
2. PNA-T细胞的直接分选。通过在体外合成HLA-抗原肽四聚体(HLA-peptide tetramer)能够有效的被特异性T细胞识别,配合流式细胞分选仪,可以从淋巴细胞中分选出抗原特异性的T细胞克隆,再通过成熟的T细胞培养方案可大量扩增相应的T细胞克隆。但分选流式仪器价格昂贵,细胞通量有限,长时间分选会影响细胞活力,对后续细胞培养造成不良影响。为此,我们建立结合HLA-抗原肽四聚体与免疫磁珠法的T细胞分选技术,有效提高细胞分选通量,且磁珠可通过后续切除消除其对细胞的影响,整个流程符合临床应用规范。下一步,我们将设法将该技术集成到单一仪器设备中,提高操作的便捷性与稳定性。
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