【实验材料】
1．仪器 试管、吸量管、试管架、T6新悦-可见光分光光度计。
2．试剂
（1）双缩脲试剂：加100 g/L氢氧化钠溶液 300 mL至500 mL含有1.5 g硫酸铜和6 g酒石酸钠钾的溶液，最后稀释至1 L。试剂可稳定储存几个月。加1 g碘化钾到1 L溶液，可在黑暗中长期储存。
（2）标准酪蛋白溶液（5 mg/mL）：用0.05 mol/L氢氧化钠溶液配制。
（3）待测样品液：稀释10倍血浆。
【实验方法】
1． 标准曲线的绘制及待测液浓度测定 取试管8支，编号，按表2-9加入试剂。
表2-9 标准曲线的绘制及待测液浓度测定
试剂（mL） | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
标准蛋白液 待测样品液 蒸 馏 水 双缩脲试剂 | — — 2.0 4.0 | 0.4 — 1.6 4.0 | 0.8 — 1.2 4.0 | 1.2 — 0.8 4.0 | 1.6 — 0.4 4.0 | 2.0 — — 4.0 | — 1.0 1.0 4.0 | — 1.0 1.0 4.0 |
2．混匀后室温放置30分钟，在540 nm波长下比色，1号管为空白对照，测得各管A值。利用1~6号管做标准曲线，7~8为待测管。根据待测管A540值从标准曲线上查出其蛋白质含量。
【注意事项】
1．注意试管编号，切勿弄混。
2．加试剂时需注意顺序，一般最后加双缩脲试剂。
3．加完所有试剂须充分混匀。
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