双缩脲法测定蛋白质含量
【实验目的】
1．掌握双缩脲法测定蛋白质的操作方法和原理。
2．学会制作及使用标准曲线。
【实验原理】
双缩脲反应（biuretreaction）是指双缩脲在碱性溶液中能与Cu2＋结合生成紫红色配合物。双缩脲可由尿素缩合而成。
由于肽键结构与双缩脲结构相似，因此含有两个或两个以上肽键的化合物也可发生双缩脲反应。蛋白质分子的肽键结构在碱性条件下可与Cu2+形成蓝色配合物。由于参与反应的是蛋白质的肽键，与组成蛋白质分子的氨基酸残基侧链R基团关系较小，因此不同蛋白质的双缩脲反应基本相似。本法的优点是颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，受蛋白质种类的影响较小和操作方法简单。缺点是灵敏度较低（蛋白质浓度须在0.5 mg/mL以上）。在一定实验条件下，未知样品与标准蛋白溶液同时反应，并于540 nm～560 nm波长比色，可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知样品的蛋白质浓度。
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