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PNAS | 利用Cas9体外鉴定特定基因位点的结合蛋白

王初课题组 2020-06-26 15:23:09

    大家好,这周我分享的文章是最新发表在PNAS上的文章“dCas9-targeted locus-specific protein isolation method identifies histone gene regulators”。本文通讯作者是UC Berkeley的美国科学院院士Rober Tjian教授。

    真核细胞的基因表达调控是一个复杂的过程,通常会有上百个蛋白参与其中。虽然传统生化研究已经鉴定了大量的参与到基因表达调控中的基本元件和辅助因子,但是特定基因的调控蛋白还很难被鉴定。为了实现特定感兴趣基因位点调控蛋白的全面分析,作者开发了体外核酸酶活性缺失的Cas9靶向的染色体纯化策略,并取名为CLASP。结合基于质谱的蛋白质组学技术,CLASP技术可以实现在不同细胞种类中特点基因位点附近的染色体结合蛋白的鉴定。

     作者将此方法应用于分离果蝇S2细胞中组蛋白集群,并鉴定了一系列调控蛋白包括Vig和Vig2,它们可以通过与3’-UTR的相互作用结合并调控组蛋白H2A和H3 mRNA。总之,作者开发了更为方便准确地体外鉴定特点基因位点结合蛋白的方法。


原文链接: http://www.pnas.org/content/pnas/early/2018/02/27/1718844115.full.pdf

doi: 10.1073/pnas.1718844115.