Angew. Chem. | 偶然发现:质谱分析中磷酸化转移揭示蛋白质相互作用区域

2023-05-10 14:56:27

本文通讯作者Albert J. R. Heck 和 Aneika C. Leney 来自Utrecht University (The Netherlands),前者主要方向为质谱分析化学,后者主要集中于蛋白质复合物质谱分析研究蛋白质翻译后修饰,例如磷酸化。


磷酸化是蛋白质中最常见的翻译后修饰之一,在蛋白质相互作用方面参与调控,因此很多研究都试图揭示磷酸化是如何调控蛋白质之间的相互作用关系,例如Pin1(peptidyl-prolyl cis-trans isomersase)和它的磷酸化底物之间的关系尚没有详细的研究。在本文中,作者试图利用native MS研究Pin1和其底物蛋白之一RNAPCTD之间的相互作用。Native MS可以在非变性条件下研究生物大分子之间的相互作用,结合二级质谱,可以确定出磷酸化修饰的位点和修饰比例。

作者首先通过native MS验证了二者能够稳定结合,然而在CID碎裂后意外的发现底物肽段上的磷酸化转移到了Pin1蛋白质上。作者又利用其它结合肽段进行了实验,发现了类似的现象,因此作者推测蛋白质复合物中磷酸化基团在CID过程中可以转移,而且和二者之间的特异性和亲和力有关。

作者对两个没有相互作用的复合物进行了验证,并没有发现磷酸化修饰的转移。同时结合三级质谱,作者确定了磷酸化修饰转移的恰好位于二者结合区域,因此,该现象的发现将有助于研究磷酸化蛋白质和其底物之间的相互作用方式,确定复合物中的结合位点。


文章引用:Phosphate Transfer in Activated Protein Complexes Reveals Interaction Sites.  Angew Chem Int Ed Engl. 2017, doi: 10.1002/anie.201706749


文章链接:http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/anie.201706749/epdf

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