蛋白质表达的若干问题

2023-05-18 23:00:13

老夫最近需要表达几个植物内源蛋白，针对蛋白表达的几个方面的问题，谈一谈几点看法。

一、关于表达系统

蛋白表达主要有原核表达、真核表达等系统，针对不同的实验需要，有不同的载体可供选择。

二、关于表达标签

有FLAG Myc His HA GFP YFP等等，前几种的标签都很小，也有商业化的抗体。

三、关于N端 C端

哎呀这是一个比较重要的问题，标签到底加在C端好，还是N端好？我们可以用信号肽预测网站http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/进行预测。把我们的氨基酸序列贴进去，如图。

可以看到3个值，我们主要看的是蓝色的Y值，说明1-19位是信号肽，19位是酶切位点，按照这个结果，把标签放在C端比较合适。

四、关于检测

一定要用WB等对表达的蛋白进行检测。

五、我的一点疑问

1、哎，真是生物化学没学好。上面的结果只能依样画葫芦，为何前面是信号肽，就要把标签放C端？

2、试了几个蛋白，似乎是信号肽都从1位开始，有没有在后面的信号肽呀？

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